酶切质粒
柱提取质粒后，未经酶切的正常状态的应该有3个条带，分别是共价闭合超螺旋DNA、开环DNA和线状DNA，有时候会出现极淡的二聚体超螺旋带。
双酶切质粒后，要看你质粒上有几个酶切位点来决定酶切后的带型。
但是你要首先保证你的质粒是被完全酶切的。
如果你能保证完全酶切，那么条带数应等于你的酶切位点数。
质粒pcr结果很好，为什么酶切却做不出来
质粒pcr结果很好，为什么酶切却做不出来既然你的质粒已经提出来了，那么感受态、转化等因素就不必再考虑了。
你看看双酶切后载体的位置有几条带，如果是两条，那说明酶切不完全，如果是一条，那说明酶切效率没问题。
pET28a分子量为5.6k，你的插入片段为500bp，如果你的质粒完全切开，载体和插入片段的摩尔比为1：1，质量比就是5.6k：0.5k，跑胶后两条带的亮度比就是10:1，所以你目的条带很淡非常正常。
换句话说，你的实验一切正常，那条500bp的条带可能本来就应该那么淡。
质粒双酶切的后目的片段怎么变大了
首先从基因序列着手检查酶切位点是否正确；检查酶切实验，确认反应条件、缓冲溶液使用正确，不存在非特异性切割。
前提是确定双酶切后载体骨架片段大小正确，条带亮度基本符合比例。
分析载体与基因片段上的某处是否有共同酶切位点，再通过载体上的通用引物对重组质粒进行PCR验证。
可以用两种酶对重组质粒和空载体分别做两组单酶切，哪一组结果与理论不一致，哪一组的酶就有问题，如果都没有问题那么很有可能是双酶切反应体系存在问题。
最后不排除琼脂糖凝胶电泳存在分子量大小的误差，视琼脂糖凝胶电泳结果图片而定。
有问题可以追问，欢迎交流。
质粒双酶切后怎么会这个样子
酶切前,质粒电泳图一般是三条条带,并认为这三条带从上到下一次是线性、开环、超螺旋.其实可能会比这条带更多些,可以认为是中间复合体状态.酶切后,因为超螺旋状态的质粒被切成线性,所以条带会有一条条带.如果是双酶切,或是质粒上的酶切位点比较多的话,会有两条或更多条带.重组质粒是把载体质粒酶切开，连接上PCR片段，然后转化感受态细胞，培养后提质粒获得的，这一系列过程中都无法检测目的基因是否连接成功了，是否转化成功了，只有对转化后的菌再次提质粒、酶切检测或PCR检测才能确定前边的步骤是否成功。
测序是更准确的方法，一般不用而已。
为什么我提的质粒浓度很高但是双酶切后浓度特别低
你确定转化过程和感受态没问题吗
有没有做过平行的其他转化对照
如果别的质粒可以转进去，并且生长，则确实说明你的转化过程和感受态没问题。
如果是这种情况，那么问题有可能是在酶切后回收这一步。
回收后的DNA质量直接影响到之后的T4连接酶作用和细菌转化。
包括酶切回收buffer没有洗脱干净，或者留有酒精（对连接酶来说是比较致命的一点），或者最后的溶解buffer的酸碱值有问题，都会影响到细菌接受质粒的。
建议你重新换一个酶切回收试剂盒。
并且每一步都做好平行对照。
查找出问题所在。
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空质粒和酶切后的质粒哪个跑的快
先连接T载体提高转化效率般说市面售T载体都进行优化容易连接片段（效率较高）构建表达载体先连接T载体同T载体测序引物比较明确（商业化缘故）测序便些更重要T载体往往设计蓝白斑筛选功能插入片段载体呈现白色容易区验证用每单菌落都拿做colony PCR或提质粒酶切验证绝我实验室经直接片段酶切连接表达载体经T载体步其实影响并情况比较特殊（比片段较或应表达载体拷贝数较低等）考虑连接T载体非必要
质粒DNA的提取及其酶切检测的实验报告怎么写
题目，原理，步骤，结果，加上电泳图
