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普通PCR心得体会

时间:2019-07-14 02:54

求助!重叠延伸PCR连接三个片段为什么连不上啊?请求高手指点!

麦德龙是世界第一的现购自运制商业集团。

1964,Otto Beisheim博士教授在德国成立了第一家针对专业顾客的麦德龙现购自运有限公司,1971年第一家海外商场开业。

现购自运的麦德龙集团是全球批发市场的领头羊,拥有麦德龙和万客隆(仅限欧洲)品牌下的多家麦德龙现购自运商场。

2002年麦德龙现购自运销售额达到240亿欧元,46.5%的集团销售额来自麦德龙现购自运,其中四分之三来自海外。

麦德龙现购自运是麦德龙集团发展的重要推动力。

目前,24个国家内437家商场,销售区域呈现出高度国际化。

2002年麦德龙在全世界拥有超过72,000名员工。

德国杜塞尔多夫麦德龙国际管理组织有限公司掌控全球销售。

  “现购自运”是指专业顾客在仓储式商场内自选商品,以现金支付并取走商品。

与传统的送货批发相比,现购自运的优势在于较好的性价比,食品和非食品分类范围广,即时获得商品,更长的营业时间。

商场提供17,000种以上食品,30,000种以上的非食品。

特别是在生鲜食品的供应上,包括水果\\\/蔬菜、活鱼、肉制品、奶制品。

麦德龙现购自运的目标顾客包括餐饮业,酒店业,食品、非食品贸易服务商以及机构采购。

他们可以找到大包装以满足特殊需求。

  麦德龙的做事方式与我们平常见到的其他连锁业态的跨国企业比,显得特立独行:    拥有自有产权的店面   40年来,它无论在全球什么地方都是强调拥有自有产权的店面。

麦德龙是仓储式会员制,目前在中国的店铺一般都超过1万多平方米,加上建筑面积和与建筑面积基本等同的停车场面积,有的甚至达到3万~5万多平方米。

与大型综合超市如家乐福与沃尔玛相比,麦德龙店对地点、面积的要求更严格,更难选到合适的店,所以,自建成为麦德龙的一贯选择。

   禁止1.2米以下的儿童进入卖场   麦德龙有条规定是,禁止1.2米以下的儿童进入卖场。

麦德龙的理由很有趣:作为一家大型仓储式商场,需要进行叉车作业,补充货品,而1.2米以下的儿童恰恰是在叉车驾驶员的视觉盲区。

   “透明”收银单   尽管你不愿意,但你的名字将不得不重复出现在你的每一张收银单上。

“透明”收银单上面详尽地排列着消费者所购商品名称、单价、数量、金额、日期和顾客姓名等。

其详细程度甚至连每包卫生纸的卷数都有说明,绝无丁点含糊。

在欧洲,这种透明方式很受欢迎,可是在中国市场推行起来却有了问题。

据说,截至 2003年初,麦德龙为此事已经遭遇了金额高达上百万元的退货。

   “会员制”   麦德龙采用的是“会员制”,只有申请加入并拥有“会员证”的顾客才能进场消费,其余消费者“请留步”。

[编辑本段]麦德龙的基本特点  麦德龙仓储式超市是将超市和仓储合而为一的零售业态。

它省掉了传统零售企业独立的仓库和配送中心,经营中实现了快速补货,保证了超市低成本高效率的运作。

仓储式超市与普通超市整体策划设计方面有明显不同。

  (一)营业场所选址上   麦德龙超市通常设在大城市城乡结合部的高速公路或主干道附近。

这样既避免了市中心及市区的交通拥挤,又因土地价格相对便宜,减少了投资风险。

同时,选址还适应了城乡一体化的发展趋势,提前占据区位优势。

它商圈的辐射半径通常为50公里。

  (二)超市建筑设计   麦德龙仓储式超市从外观看就象一个现代化的大仓库,其营业面积一般为15,000~20,000平方米。

外部设有与营业面积几乎相等的停车场,内部结构比较简单,通常采用高4.5米的工业用大型货架。

货架下半部分用于商品的陈列展示,与普通超市无异:而其上半部分则用于相应商品的存放,起到了仓库的作用,从而使销售和仓储合为一体。

货架间距较大,便于存取货物的叉车通过,完成迅速补货的工作。

  (三)商品定位   商品内容丰富,品种齐全,通常在20,000种以上,可满足客户“一站式购物”的需求。

如麦德龙商品种类中食品占40%,非食品占60%。

食品类商品以时令果蔬、鲜肉、鲜鱼、奶制品、冷冻品、罐头、粮食制品、饮料、甜点为主,品种相对稳定。

非食品领域的商品则按季节和顾客需要定期调整,涉及范围较广不仅包括日常生活用品、办公用品,还包括小型机械工具类产品。

仓储式超市摆设的绝大多数商品都是捆绑式或整箱销售,除家电类、机械类产品外很少有单件摆设展示的商品。

[编辑本段]麦德龙仓储式超市的营销策略  仓储式超市实际上就是以零售的方式来从事批发业务。

超市既是服务中心又是配送批发中心。

这种差异化的市场定位使麦德龙成为了专业客户的超级仓库。

  (一)有限的目标顾客   绝大多数普通超市的目标消费群是无差异性的,即服务对象是全体普通消费者,消费者短期内的重复购买率高,但每次的购买量不大,多为临时性随机性消费行为。

而仓储式超市的目标消费群比较明确,麦德龙针对“有限”客户,即只对工商领域的经营者、群体消费层实行会员制,会员必须是具有法人资格的企事业单位。

  (二)直邮广告促销   麦德龙超市一般不通过大众媒体进行广告宣传,而是利用直邮广告进行促销。

它们向所有会员每两周邮递一份“麦德龙邮报”。

邮报是一份详尽全彩页的商品目录,介绍了半个月内商品的最新价格,新增商品以及近期开展促销的商品信息。

邮报不仅使会员及时了解商品信息,而且帮助企业有效地降低采购成本,提高客户采购的透明性和公正性。

  (三)特色化商品营销   面对零售业内竞争压力逐渐增大,麦德龙不是单纯以价格低廉吸引顾客,而是从商品入手,以独家商品、特色商品及自有品牌商品吸引顾客。

在每个麦德龙卖场都有一些诸如奶酪、吉士、黄油、咖啡、咖喱粉等特有的进口商品和一些跨地域的特色商品,比如青岛麦德龙是全市最早销售泥螺、腊鸭、糯米藕等南味食品的超市。

此外,麦德龙的自有品牌商品除了日常生活用品还有涉及到了五金工具等。

  (四)企业套餐服务   麦德龙公司利用“顾客节”表明企业对小型工商业户的重视,重申以顾客为合作伙伴、与顾客共同发展的服务理念,从而赢得了顾客的好感和信任。

2000年4月上海麦德龙举行的“顾客节”活动,推出了10份为工商业户提供具有专业水准的“套餐”——帮助他们选择最适合的商品,让它们“用最少的钱,配最全的货”;这其中有为小型装修队选配所需电动工具和手动工具提供的商品建议清单;有为小型餐饮业准备的各种套餐餐具;有为企事业单位准备的福利套餐商品建议目录,等等。

  (五)销售模式   麦德龙集团旗下的零售业态有:现付自运制(cash & carry简称 C& C)商场 Metro C&C、Mekro C&C;大型百货商场 Galeria;超大型超市折扣连锁店 Real.、Extra和专卖店 Media\\\/Saturn Praktiker。

麦德龙集团在进入中国之前,对中国市场曾做过长达六年的市场调研,在对市场分析预测的基础上最终只选择了现付自运制。

现付自运制是顾客在超市内自由挑选商品,结算时只能使用现金,不能赊账或使用信用卡等,超市不向顾客提供资金帐期,购物后顾客自己将商品运回。

这种模式适应了快速高效的销售需要,大大降低了超市的营运成本。

[编辑本段]麦德龙仓储式超市的销售管理  麦德龙C&C营销体制在中国的成功推行应归功于其完善的内部管理体系和高度的管理信息化。

经过三十多年的经营发展麦德龙自创了一套适合C&C体制的商品信息管理系统和会员信息管理系统,使内部管理成功实现了信息化。

  (一)客户管理   最初,麦德龙的服务人员将会员填写的《客户登记卡》的资料输入微机,创建顾客的初始资料。

会员信息管理系统自动记录顾客每一次的购买情况,根据各类客户的购买频率和消费结构,准确分析出客户需求的动态发展趋势,使麦德龙能对顾客需求变化迅速做出反应,及时调整商品结构和经营策略,最大程度地满足顾客需求。

  麦德龙根据客户规模和购买量将客户分“ABC”三类,其专门成立的“客户顾问组”,对客户的消费结构进行分析,向客户(特别是中小企业)提供特色咨询服务。

同时,与主要的客户进行沟通,向他们提出采购建议,帮助客户降低采购成本。

通过提供全方位服务,麦德龙不仅拥有了大批的稳定客户,还及时掌握了市场需求动态,从而提高了商品管理的主动性和灵活性。

  (二) 商品管理   麦德龙的商品采购管理实行中央采购制,即连锁总部统一采购,各地连锁店无独立的采购决策权。

总部统一采购后根据各连锁店的销售情况分别确定配送计划,进行统一配送。

统一大批量采购既加强了总部对采购的控制,又降低了进货成本。

麦德龙通过商品信息系统掌握商品进销存的全部资料,从商品的选择,订货,再订货,收货到销售,收银,每一个环节都通过电脑完成。

信息系统根据历史资料,自动地预测销售,制定采购计划,产生订单,将存货控制在最合理的范围。

  (三)供货商管理   作为一家跨国连锁零售集团,麦德龙对供货商提供产品的质量和供货能力的稳定性要求很高。

因此它们在与供应商建立购销关系时一般不采用常规签订书面购销合同的方式,而是按照已确立完整的交易惯例,通过一套系统的操作程序来获得质量稳定的商品,保证可靠的供应。

  麦德龙有一份专门为供应商制作的《麦德龙供货商手册》,内容包括凭据、资料填写、订货、供货、价格变动、账单管理、付款等过程的每一个环节以及双方当事人应予遵循的交易规则和操作程序。

双方确认后,麦德龙和供货商之间形成长期合作关系,不再就单笔交易签订采购合同。

通过这种规范化采购的运作,麦德龙把供应商纳入自己的管理体系,将供应商的运输系统组合成为自己的商品配送系统,从而大大降低了企业的投资,实现了低成本运营。

  为了维护与供货商之间的伙伴关系,采购过程中麦德龙会协助供应商选择最经济的送货路线,帮助供应商利用互联网接受订单,以降低订单处理成本,并通过及时向供应商提供有关市场需求方面的信息。

  (四)销售计划管理   为了实现采销合一,麦德龙的销售计划是由采购部门来负责实施的。

这与一般的零售企业不同,麦德龙的销售计划是按促销活动制定活动的节目,所以也被称作节目单销售计划。

这种计划的制定要有相当的超前性,以便有充裕的时间进行统筹安排。

计划成功的关键是销售计划与采购计划的一致和购销计划与供货商商品促销计划的有机结合。

  (五)财务管理   麦德龙利用由全球最大的企业管理软件供应商德国SAP公司提供的R\\\/3系统对财务采取集中统一管理。

在国内,各地连锁店每天发生的每一笔销售数据,均通过网络传送至上海总部,由上海总部统一进行会计核算。

采购货款的支付也由上海总部统一控制,而各地连锁店的财务人员只负责每天的收银汇总及在上海总部核定的备用金使用范围内,报销日常的费用开支。

这种管理模式使得企业财务管理高度透明化,财务成本维持在一个比较低的水平上。

蛋白的表达与纯化

蛋白表达纯化已经是经典简单的了,没有LSS说的那么吓人。

我的蛋白表达纯化下面的单抗制作工作总体设计概要吧:1 首先要知道你要纯化蛋白的编码DNA序列,查阅相关文献,看目的基因在那些细胞或者组织中高表达,进而设计该基因的引物,扩增出目的DNA片段的ARF。

这一布叫目的基因片段的获取2 构建表达载体:根据你获得的基因本身的特性确定原核或者真核载体中表达,这一步的主要问题就是构建带有目的基因的质粒,导入表达系统中。

一般原核表达时间短,成本低,表达量大,常优先考虑;但是有些基因在E coli中就是表达不出,可能是密码子优化等出现问题,也或者是由于想纯化得到更好的活性蛋白的考虑(原核的蛋白折叠系统显然没有真核的好),有很多研究者选择在毕赤酵母中表达。

(我手里就有相关资料,因为以前做过表达纯化及后来的单抗制备),这一步再强调一下,优化密码子对于蛋白的成功表达很重要3 载体构建好了,下面就是重组蛋白的表达了。

这一过程涉及到用多少的诱导剂,诱导多少时间才能得到最多的蛋白的问题,即优化表达条件。

就是在上述不同量诱导剂诱导条件下,取菌体上清(分泌型)或者破碎细胞(胞内表达的蛋白)电泳,看是否得到目的分子量大小的蛋白4 蛋白表达成功,下面是根据蛋白质本身亲水\\\/疏水,电荷带电特性等确定蛋白纯化的方法。

一般步骤:离心,取蛋白所在的相如果是分泌表达的蛋白,则取上清,超滤,没有超滤仪器可以用透析袋等代替,用离子交换柱层析。

基本上这一步能得到纯化的95%的蛋白,电泳鉴定基本不会看到有杂带出现。

如果还是纯度不符合要求,可以在表达蛋白最初在构建表达载体质粒的时候在蛋白的ORF后面加上HIS-标签,这样得到的蛋白不但可以用于HIS柱的进一步纯化,在不确定自己的融合蛋白是否有表达的时候,也可以单单用抗HIS的抗体做一WB,分析确认目的蛋白是否表达,这是蛋白表达的常用手段。

5 经过纯化后的蛋白仍然含有一部分无机盐,如果需要的话可以将蛋白经真空冻干机冻干,得到纯蛋白。

我们实验室做出来的一个蛋白,编码序列GC含量高75达%,但是功夫不负有心人,只要你想做那件事情,积极的寻找解决问题的手段,总会搞定的,没有跨不过的坎。

如果坎太宽,搭桥解决总行。

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微生物对人类最重要的影响之一是导致传染病的流行。

在人类疾病中有50%是由病毒引起。

世界卫生组织公布资料显示:传染病的发病率和病死率在所有疾病中占据第一位。

微生物导致人类疾病的历史,也就是人类与之不断斗争的历史。

在疾病的预防和治疗方面,人类取得了长足的进展,但是新现和再现的微生物感染还是不断发生,像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治疗药物。

一些疾病的致病机制并不清楚。

大量的广谱抗生素的滥用造成了强大的选择压力,使许多菌株发生变异,导致耐药性的产生,人类健康受到新的威胁。

一些分节段的病毒之间可以通过重组或重配发生变异,最典型的例子就是流行性感冒病毒。

每次流感大流行流感病毒都与前次导致感染的株型发生了变异,这种快速的变异给疫苗的设计和治疗造成了很大的障碍。

而耐药性结核杆菌的出现使原本已近控制住的结核感染又在世界范围内猖獗起来。

微生物千姿百态,有些是腐败性的,即引起食品气味和组织结构发生不良变化。

当然有些微生物是有益的,它们可用来生产如奶酪,面包,泡菜,啤酒和葡萄酒。

微生物非常小,必须通过显微镜放大约1000 倍才能看到。

比如中等大小的细菌,1000个叠加在一起只有句号那么大。

想像一下一滴牛奶,每毫升腐败的牛奶中约有5千万个细菌,或者讲每夸脱牛奶中细菌总数约为50亿。

也就是一滴牛奶中可有含有50 亿个细菌。

微生物能够致病,能够造成食品、布匹、皮革等发霉腐烂,但微生物也有有益的一面。

最早是弗莱明从青霉菌抑制其它细菌的生长中发现了青霉素,这对医药界来讲是一个划时代的发现。

后来大量的抗生素从放线菌等的代谢产物中筛选出来。

抗生素的使用在第二次世界大战中挽救了无数人的生命。

一些微生物被广泛应用于工业发酵,生产乙醇、食品及各种酶制剂等;一部分微生物能够降解塑料、处理废水废气等等,并且可再生资源的潜力极大,称为环保微生物;还有一些能在极端环境中生存的微生物,例如:高温、低温、高盐、高碱以及高辐射等普通生命体不能生存的环境,依然存在着一部分微生物等等。

看上去,我们发现的微生物已经很多,但实际上由于培养方式等技术手段的限制,人类现今发现的微生物还只占自然界中存在的微生物的很少一部分。

微生物间的相互作用机制也相当奥秘。

例如健康人肠道中即有大量细菌存在,称正常菌群,其中包含的细菌种类高达上百种。

在肠道环境中这些细菌相互依存,互惠共生。

食物、有毒物质甚至药物的分解与吸收,菌群在这些过程中发挥的作用,以及细菌之间的相互作用机制还不明了。

一旦菌群失调,就会引起腹泻。

随着医学研究进入分子水平,人们对基因、遗传物质等专业术语也日渐熟悉。

人们认识到,是遗传信息决定了生物体具有的生命特征,包括外部形态以及从事的生命活动等等,而生物体的基因组正是这些遗传信息的携带者。

因此阐明生物体基因组携带的遗传信息,将大大有助于揭示生命的起源和奥秘。

在分子水平上研究微生物病原体的变异规律、毒力和致病性,对于传统微生物学来说是一场革命。

以人类基因组计划为代表的生物体基因组研究成为整个生命科学研究的前沿,而微生物基因组研究又是其中的重要分支。

世界权威性杂志《科学》曾将微生物基因组研究评为世界重大科学进展之一。

通过基因组研究揭示微生物的遗传机制,发现重要的功能基因并在此基础上发展疫苗,开发新型抗病毒、抗细菌、真菌药物,将对有效地控制新老传染病的流行,促进医疗健康事业的迅速发展和壮大!从分子水平上对微生物进行基因组研究为探索微生物个体以及群体间作用的奥秘提供了新的线索和思路。

为了充分开发微生物(特别是细菌)资源,1994年美国发起了微生物基因组研究计划(MGP)。

通过研究完整的基因组信息开发和利用微生物重要的功能基因,不仅能够加深对微生物的致病机制、重要代谢和调控机制的认识,更能在此基础上发展一系列与我们的生活密切相关的基因工程产品,包括:接种用的疫苗、治疗用的新药、诊断试剂和应用于工农业生产的各种酶制剂等等。

通过基因工程方法的改造,促进新型菌株的构建和传统菌株的改造,全面促进微生物工业时代的来临。

工业微生物涉及食品、制药、冶金、采矿、石油、皮革、轻化工等多种行业。

通过微生物发酵途径生产抗生素、丁醇、维生素C以及一些风味食品的制备等;某些特殊微生物酶参与皮革脱毛、冶金、采油采矿等生产过程,甚至直接作为洗衣粉等的添加剂;另外还有一些微生物的代谢产物可以作为天然的微生物杀虫剂广泛应用于农业生产。

通过对枯草芽孢杆菌的基因组研究,发现了一系列与抗生素及重要工业用酶的产生相关的基因。

乳酸杆菌作为一种重要的微生态调节剂参与食品发酵过程,对其进行的基因组学研究将有利于找到关键的功能基因,然后对菌株加以改造,使其更适于工业化的生产过程。

国内维生素C两步发酵法生产过程中的关键菌株氧化葡萄糖酸杆菌的基因组研究,将在基因组测序完成的前提下找到与维生素C生产相关的重要代谢功能基因,经基因工程改造,实现新的工程菌株的构建,简化生产步骤,降低生产成本,继而实现经济效益的大幅度提升。

对工业微生物开展的基因组研究,不断发现新的特殊酶基因及重要代谢过程和代谢产物生成相关的功能基因,并将其应用于生产以及传统工业、工艺的改造,同时推动现代生物技术的迅速发展。

农业微生物基因组研究认清致病机制发展控制病害的新对策据资料统计,全球每年因病害导致的农作物减产可高达20%,其中植物的细菌性病害最为严重。

除了培植在遗传上对病害有抗性的品种以及加强园艺管理外,似乎没有更好的病害防治策略。

因此积极开展某些植物致病微生物的基因组研究,认清其致病机制并由此发展控制病害的新对策显得十分紧迫。

经济作物柑橘的致病菌是国际上第一个发表了全序列的植物致病微生物。

还有一些在分类学、生理学和经济价值上非常重要的农业微生物,例如:胡萝卜欧文氏菌、植物致病性假单胞菌以及我国正在开展的黄单胞菌的研究等正在进行之中。

日前植物固氮根瘤菌的全序列也刚刚测定完成。

借鉴已经较为成熟的从人类病原微生物的基因组学信息筛选治疗性药物的方案,可以尝试性地应用到植物病原体上。

特别像柑橘的致病菌这种需要昆虫媒介才能完成生活周期的种类,除了杀虫剂能阻断其生活周期以外,只能通过遗传学研究找到毒力相关因子,寻找抗性靶位以发展更有效的控制对策。

固氮菌全部遗传信息的解析对于开发利用其固氮关键基因提高农作物的产量和质量也具有重要的意义。

环境保护微生物基因组研究找到关键基因降解不同污染物在全面推进经济发展的同时,滥用资源、破坏环境的现象也日益严重。

面对全球环境的一再恶化,提倡环保成为全世界人民的共同呼声。

而生物除污在环境污染治理中潜力巨大,微生物参与治理则是生物除污的主流。

微生物可降解塑料、甲苯等有机物;还能处理工业废水中的磷酸盐、含硫废气以及土壤的改良等。

微生物能够分解纤维素等物质,并促进资源的再生利用。

对这些微生物开展的基因组研究,在深入了解特殊代谢过程的遗传背景的前提下,有选择性的加以利用,例如找到不同污染物降解的关键基因,将其在某一菌株中组合,构建高效能的基因工程菌株,一菌多用,可同时降解不同的环境污染物质,极大发挥其改善环境、排除污染的潜力。

美国基因组研究所结合生物芯片方法对微生物进行了特殊条件下的表达谱的研究,以期找到其降解有机物的关键基因,为开发及利用确定目标。

极端环境微生物基因组研究深入认识生命本质应用潜力极大在极端环境下能够生长的微生物称为极端微生物,又称嗜极菌。

嗜极菌对极端环境具有很强的适应性,极端微生物基因组的研究有助于从分子水平研究极限条件下微生物的适应性,加深对生命本质的认识。

有一种嗜极菌,它能够暴露于数千倍强度的辐射下仍能存活,而人类一个剂量强度就会死亡。

该细菌的染色体在接受几百万拉德a射线后粉碎为数百个片段,但能在一天内将其恢复。

研究其DNA修复机制对于发展在辐射污染区进行环境的生物治理非常有意义。

开发利用嗜极菌的极限特性可以突破当前生物技术领域中的一些局限,建立新的技术手段,使环境、能源、农业、健康、轻化工等领域的生物技术能力发生革命。

来自极端微生物的极端酶,可在极端环境下行使功能,将极大地拓展酶的应用空间,是建立高效率、低成本生物技术加工过程的基础,例如PCR技术中的TagDNA聚合酶、洗涤剂中的碱性酶等都具有代表意义。

极端微生物的研究与应用将是取得现代生物技术优势的重要途径,其在新酶、新药开发及环境整治方面应用潜力极大。

重组质粒构建的注意事项

重组质粒构建是常用的分子生物学手段,其实只是最基本的方法,一般一个星期同时构建三二个组质粒是没有问题的。

在国内先进的实验中,也大都是由实验员搞定。

但是其中还是有些基本的技巧需要掌握。

在这里将我的心得分享于大家,这也是我本人几年来一线工作时的经验积累,以期能为谷友提供借鉴,让大家在实验中少走弯路。

所涉及内容如下: 1) 克隆基因的酶切位点问题 2) 载体酶切的问题 3) 连接片段浓度比的问题 在阐明上述问题同时,本人尽可能举些实验中的问题案例予以说明。

一、克隆基因的酶切位点问题 1、克隆位点选择的问题。

首先要对目标基因进行酶切位点扫描分析,列出其所含酶切位点清单。

然后对照质粒多克隆位点,所选择的克隆位点必须是目标基因所不含的酶切位点。

这是常识,不赘述。

2、保护碱基数目的问题。

在设计PCR引物时,引入酶切位点后,常常要加入保护碱基,这是大家所熟知的。

但是保护碱基数量多少,可能被新手所忽视。

这种忽视碰可能会大大影响后续的实验进展。

一般情况下,普通的内切酶只加入两个保护碱基,其内切反应就可以正常进行;而有一类,仅仅只加入两个保护碱基,其内切反应就不能正常进行,这是因为内切酶不能正常结合DN段上。

如NdeI就属这类,需要加入至少6个保护碱基,常用的HindIII也要三个。

关于遗传稳定性的疑问

我不是专业人士,不过我个人对生物很有兴趣

我自己高中时候学的就是生物,虽然大学里不幸没能录取这个专业,不过我对于生物的遗传还是有点自己的心得吧算是

这位朋友你说的没错,基因的对数越多,多样性也会更加明显,理论上是这样的

我不知道你是否知道有些基因是需要多对才能控制生物的某一个性状

那么这样的话,首先,理论上的可能性的数目将大大减少···比如R是显性基因,代表黄色,r是隐性基因,代表白色,那么在生物的后代中,R所代表的性状将是很高的概率,个体越多,越接近于3\\\/4的是黄色···如果加上环境因素,周围是黄色的环境,那么白色就会更少,天敌很容易猎食白色的那部分···如果出现基因漂移,可能会使种群内的r基因彻底消失···当然这是极其偶然的情况下,但不是不可能

长颈鹿是由于长时间环境影响,可能导致其短颈基因的丢失···多样性只是针对于唯一性,并不是指要几千、几万种可能的意思···遗传的稳定性,旨在说明子代的基因可以从母代获取,如果不出现基因变异,那子代的基因基本上可以与母代类似···当然又有多种生殖方式了···肉牛的选优我没有去网上查过,这个不能只简单的就归结为杂交,现在的生物技术很多还不是被人们详知

如果仅仅简单的杂交,要去除其中非肉牛之类的,加上饲养,成本何其高,所以应该有其他技术在里面,我不能乱下定论,毕竟我知道的有限

具体标准不是很清楚,不好意思

BLAST设计引物的问题

这个参数其实是选定物种,你可以尝试在第一次设计的时候,只添加你做的果树的物种的拉丁名去检索。

获得理想的序列以后,用病毒的基因组去blast,确认你的引物序列在里面没有,或很少有同源序列就好了。

如果确认你的样品中有这个序列,引物用primer设计过没有问题,最好能够查看一下:1.样品制备的问题,是否能够再次纯化模板DNA,或者是稀释模板,减少样品中的干扰成分2.选择热启动DNA聚合酶,减少非特异扩增(或者选择商品化的Mix,Mix都经过优化的,扩增能力比普通Taq酶,或者是高保真酶要强)3.用梯度PCR的方式,摸索最佳的退火温度,减少非特异扩增4.如果确实有其他外源DNA的污染,最好把水,引物,酶全部都换新的再试,因为一旦出现污染,哪怕只是一点点,也会对结果有很大干扰的。

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