怎样研究一个未知基因
克隆后需要在烟草内验证功能基因的克隆利用体外重组技术,将特定的基因和DNA顺序插入到载体分子中。
基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的 全序列,确定染色体定位,阐明基因的生化功能,明确其对特定性状的遗传控制关系。
通过几十年的努力由于植物发育,生理生化,分子遗传等学科的迅速发展,使 人们掌握了大量有关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识,再运用先进的酶学和生物学技术已经克隆出了与植物抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆,育性、高蛋白质 及与植物发育有关的许多基因。
我们实验室对天麻抗真菌蛋白基因作了功能克隆的研究(舒群芳等,1995;舒群芳等,1997),为了克隆植物基因也探讨了 其它克隆方法,本文论述基因克隆的策略、方法及取得的一些进展。
1 功能克隆(functional Cloning)功能克 是根据性状的基本生化特性这一功能信息,在鉴定和已知基因的功能后克隆(Collis,1995)。
其具体作法是:在纯化相应的编码蛋白后构建 cDNA文库或基因组文库,DNA文库中基因的筛选根据情况主要可用二种办法进行,(1)将纯化的蛋白质进行氨基酸测序,据此合成寡核苷酸探针从cDNA 库或基因组文库中筛选编码基因,(2)将相应的编码蛋白制成相应抗体探针,从cDNA入载体表达库中筛选相应克隆。
功能克隆是一种经典的基因克隆策略,很 多基因的分离利用这种策略。
Hain等从葡萄中克隆了两个编码白藜芦醇合成的二苯乙烯合成酶基因(Vst1和Vst2),葡萄中抗菌化合 物白藜芦醇的存在,可以提高对灰质葡萄孢(Botrytis cinerce)的抗性,在烟草和其它一些植物中无二苯乙烯合成酶,因此克隆该基因经过转基因后,对有些植物产生对灰质葡萄孢的抗性很有意义(Hain 等,1985)。
Kondo等1989年对编码水稻巯基蛋白酶抑制剂的基因组DNA做了克隆和序列分析(Kondo等,1989)。
周兆斓等构建了水稻 cDNA文库,分离了编码水稻巯基蛋白酶抑制剂的cDNA(周兆斓等,1996)。
植物蛋白酶抑制剂是一类天然的抗虫物质,它可抑制摄食害虫对蛋白质的消 化,使害虫因缺乏所需氨基酸而导致非正常发育或死亡。
胡天华等人从烟草中分离出流行于我国的黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic virus)(CMV),并克隆了编码该病毒外壳蛋白的cDNA基因(胡天华等,1989)。
王春香等从感病的烟草叶片中分离纯化了马铃薯x病毒 (potato virus X, pvx),克隆了完整的马铃薯x病毒外壳蛋白基因,并将外壳蛋白基因转入马铃薯中,以期获得抗pvx病毒的栽培种马铃薯(王春香等,1991)。
病毒外壳 蛋白(Coat protein cp)基因的成功克隆,可使转基因植物中产生病毒外壳蛋白基因介导的抗性(Coat Protein Mediated Resistance CPMR)或病毒CP-RNA介导的抗性。
Van kan 报道从真菌中成功的克隆出无毒基因Avr9,可直接利用此基因介导广谱高效的基因工程植物(Van Kan等,1991)。
我们1995年构建了天麻cDNA文库,制备抗体探针成功地分离了编码天麻抗真菌蛋白基因的cDNA克隆,为抗真菌基因在农业、医 药等方面的应用打下了基础(舒群芳等,1995;舒群芳等,1997)。
功能克隆的特点是用基因表达的产物蛋白质来克隆基因、虽然某一性状的编码基因是未 知的。
如果对其生理生化及代谢途径研究的比较清楚,就可以分离和纯化控制该性状的蛋白质。
因此功能克隆的关键是分离出一个纯度很高的蛋白质。
只要有一个纯 的蛋白质,得到十分特异的探针,这一策略是行之有效的。
采用功能克隆方法虽然已经克隆了很多基因,但由于绝大多数基因的产物目前还不知道。
所以大多数基因 难以用这一经典的方法来克隆。
随着分子生物学技术的发展,一条新的基因克隆策略逐渐形成,这就是定位克隆。
2 定位克隆(Positional cloning)根据遗传连锁分析,染色体步移将基因定位到染色体的一个具体位置上后不断缩小筛选区域进而克隆该基因,研究该基因的功能或抗性的生化机制,这样一种策略 叫定位克隆(Monaco,1994)。
连锁分析即通过基因与DNA标记之间的重组系数来估计这两者之间的距离,若某种性状的基因与DNA标记在子代不分 离,即有连锁在一起的趋势。
根据这一原理可将与已知的某一DNA标记连锁的基因在染色体上定位。
由于连锁分析需要依赖特定的基因作为连锁标记,即标记基因 与待研基因之间存在连锁关系,而满足与待研基因相连锁的基因实在太少,所以连锁分析对克隆大多数基因存在着一定的困难。
RFLP的出现使多态性基因标记存 在于整个基因组内,解决了连锁分析中难以克服的困难。
1980年Wyman等科学家首次建立了限制酶切片段长度多态性RFLP (restriction fragment length polymorphism),使对任何一种表型相关的基因的定位成为可能。
限制酶切片段长度多态性是用限制性内切酶切割后产生的DNA片段长度的多态性呈 孟德尔式遗传,是存在于全基因组的独特的多态标记,RFLP使基因定位变得易行(Wyman等,1980)。
目前定位克隆一般是用RFLP等分子标记制作 遗传图谱,寻找与待测基因连锁的RFLP标记,获得基因在染色体上的定位然后克隆基因。
所以RFLP和后来发展起来的RAPD技术的建立,可将待测基因相 对准确地定位,利用已知的基因可分离与之连锁的未知基因。
其基本程序是构建一个基因组文库、用已知的A基因为探针,从基因组文库中筛选出与其有同源序列的 a克隆,再用a克隆为探针从基因组文库中筛选出与a克隆有同源序列的b克隆,然后以此类推最后筛选出未知基因并把它分离出来。
目前已在番茄、烟草、大麦、 水稻、大豆、玉米等植物中发现了与抗病基因紧密连锁的RFLP标记并构建了遗传图谱(Figdore等,1988;Heun等,1991;Smith, 1991;Diers等,1992)。
用这种方法已分别克隆到拟南芥菜、番茄、水稻等植物中的有关抗病基因(Martin等,1993;Bent等, 1994;Mindrinos等,1994;Wenyuan等,1995) 。
Martin等1993年最早用定位克隆技术克隆出番茄pto基因,pto基因负责对带有无毒基因Avrpto的细菌,丁香假单胞菌 (pseudomonas syringae pv)菌株的抗性,Pto基因导入感病番茄后转基因植株增强了对病原菌的抗性(Martin等,1993)。
Wenyuan等1995年用这一技术克隆了 水稻Xa21基因,Xa21基因对真菌Xanthomonas oryzae pv oryzae (Xoo)具有抗性(Wenyuan等,1995)。
3 转座子标记法(transposon tagging)转座子是可从 一个基因位置转移到另一位置的DNA片段。
在转座过程中原来位置的DNA片段(转座子)并未消失,发生转移的只是转座子的拷贝、基因发生转座可引起插入突 变使插入位置的基因失活并诱导产生突变型或在插入位置上出现新的编码基因。
通过转座子上的标记基因(如抗药性等)就可检测出突变基因的位置和克隆出突变基 因来。
转座子标记法是把转座子作为基因定位的标记和通过转座子在染色体上的插入和嵌合来克隆基因(Fedoroff等,1984;Jones等, 1994)。
利用转座子克隆植物基因的操作步骤主要应是以下几方面:(1) 把已分离得到的转座子与选择标记构建成含转座子的质粒载体。
(2) 把转座子导入目标植物。
(3) 利用Southern杂交等技术检测转座子是否从载体质粒中转座到目标植物基因组中,这是转座子定位和分离目标基因所不可缺少的。
(4) 转座子插入突变的鉴定及其分离(Ellis等,1992)。
通常用于克隆植物基因的转座子有玉米的Ac. Mu, Smp和Ds等。
Ac含有编码转座酶的基因,能够自主的转座,Ds不含转座酶所以不能自主的转座,但Ds-Ac系统因Ac为Ds提供了转座酶就可以自主的 转座了。
用转座子标记法进行植物基因的分离,首要的是把Ac等转座子转化到要进行基因克隆的植物中,目前多数是利用土壤农杆菌介导的转化系统把转座子导入 目标植物中(Keller等,1993;Bancroft等,1993)。
目前已在玉米、烟草、番茄、亚麻等植物中克隆出抗性基因(Johal和 Briggs,1992;Whitham等,1994;Jones等,1994;Gregory等,1995)。
Johal和Brigge分离出抗灰色长 蠕孢(Helminth osporium carbonum)1号小种玉米的HMI特异真菌抗性基因。
该基因存在于玉米的抗性品种中,能够分解长蠕孢1号小种产生的对玉米具特异致病性的HC毒素, 该基因编码HC毒素脱毒酶可使植物具有抗病性(Johal和Briggs,1992)。
和转座子标记法的原理相似的还有T-DNA标记法,两者都是由于一 段基因的插入导致染色体结构发生变化产生突变体,而T-DNA标记法产生的突变是由于T-DNA插入导致的。
Kenneth等利用T-DNA插入标记培育 出拟南芥矮化突变体(Kenneth等,1989)。
4 人工合成并克隆基因蜘蛛毒素是一种小肽,它只有37个氨基酸,体外实 验表明它能杀死多种对农作物有害的昆虫,蒋红等1995年根据蜘蛛毒素的氨基酸序列,采用植物偏爱密码子、人工合成并克隆了此肽的基因(蒋红等, 1995)。
Adang 1995年人工合成了苏云金杆菌毒蛋白(Bacillus thuringiensis insecticidal crystal protein)基因(Adang等,1995)。
5 表型克隆(phenotype cloning)1995年Jonsson和Weissman提出表型克隆概念(Jonsson和Weissman,1995),有些植物目前即不了解它的基因产物,也没 有对它们进行基因定位,但已知植物在表型上存在差异,利用表型差异或组织器官特异表达产生的差异来克隆植物基因就是表型克隆。
San等用表型差异从拟南芥 中克隆出赤霉素合成酶基因(Sun等,1992)。
表型克隆在策略上试图将表型与基因结构或基因表达的特征联系起来,从而分离特定表型相关基因,力求不必 事先知道基因的生化功能或图谱定位，根据基因的表达效应就直接分离该基因(Brown,1994)。
6 mRNA差异显示(mRNA differential display)1993年Liang和Averboukh 等科学家提出了mRNA差异显示(mRNA DD, mRNA differential display)的方案(Liang等,1993)。
这一方案的依据是在高等真核生物中所有的生命过程和病理变化,不论是由单基因控制的还是由多基因控制 的,最终都是通过基因表达的质或量的差异而体现出来。
研究基因表达差异,研究两基因组差异表达基因的分离,为克隆复杂性状相关基因开辟了重要的途径。
该方 案可以检测、分离出全长任何部分有突变的mRNA,其基本程序是:(1)提取两种细胞的mRNA,反转录后成为2种cDNA。
(2) 以一定的引物作随机聚合酶链反应。
(3) 通过扩增产物的电泳分析,分离出不同样品间的差异条带。
(4)将差异DNA做成探针。
(5) 在cDNA文库或基因组文库中筛选基因并作功能分析(Baeur等,1993)。
Liang和Pardee又建立了mRNA差别显示PCR方法 (Liang和Pardee,1992),该方法可以同时分析几个样品间基因的表达,检测灵敏度高,PCR扩增后,一些表达量很低的mRNA也能被检测出 来,应用PCR及DNA测序，两种技术简单易行,目前已被成功地用来分离小麦热激蛋白基因(Joshi等,1996)和水稻蔗糖调节基因(Tseng等, 1995)等。
7 减法杂交(Subtractive hybridization)Lee等1991年提出减法杂交技术 (Lee等,1991),植物在生长发育过程中不同组织或同一组织的不同发育阶段,由于基因特异性的表达,其mRNA表现不同,这样从表达特异基因的组织 中提取 mRNA,反转录为cDNA,从无特异基因表达的组织中提取mRNA,两者杂交,在表达特异基因的组织和无特异基因表达的组织中均表达的基因产物形成杂交 分子,而特异mRNA转录的cDNA仍保持单链状态,把这种单链cDNA分离出来即为差异表达的基因,Chong等用此技术克隆了小麦春化相关基因 (Chong等,1994)。
8 PCR扩增克隆这是一种参考已知基因的序列克隆基因的方法。
目前已经知道了很多植物基因的序 列,当克隆类似基因时可先从Gene bank库中找到有关基因序列,用PCR方法克隆不同植物的基因。
基本方法是根据已知基因的序列设计并合成一对引物,从植物中提取DNA进行PCR扩增, 扩增的片段纯化后连接到合适的载体上,用酶切分析和序列分析检测重组子,并与已知基因序列进行比较,如目前已在玉米、水稻、向日葵、巴西豆等植物中分离出 富含甲硫氨酸的蛋白及其编码基因,根据Masumura等(1989)发表的10KD水稻醇溶蛋白基因序列合成一对引物,王广立等克隆了水稻10KD醇溶 蛋白基因(王广立等,1994)。
9 依据序列同源性克隆基因生物的种、属之间编码基因序列的同源性高于非编码区的序列。
此方 法的基本作法是在其它种属的同源基因被克隆的前提下,构建cDNA文库或基因组文库,然后以已知的基因序列为探针来筛选目的克隆。
马德钦等根据文献报道的 甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因的序列作了菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆和序列分析(马德钦等,1996)。
综上所述,可见发现和克隆基 因的过程是艰巨和富有收获的,几十年来各国科学家在基因克隆这一最激动人心的生物高技术领域内走过了艰难而又曲折的历程,从而创造和发展了上述种种植物基 因克隆的方法,使人类在认识自然、掌握自然的道路上又前进了一步。
前辈所创造的成就和技术无疑为我们成功地克隆植物基因提供了快捷和高效的途径。
利用已知 序列克隆基因,用同种或同属的已知的同源序列筛选基因都比较容易,适合于克隆那些研究较晚的许多重要农作物的基因。
获得极纯的蛋白质是功能克隆的关键,随 着蛋白质纯化技术的提高,功能克隆将发挥它的潜在作用。
随着植物遗传图谱上基因定位基础研究工作的提高,定位克隆将发挥其巨大的作用。
关于现在一些新型成语的解释，求详细解释(十动然拒、累觉不爱...之类）
姓名：金善雅 性别：女 原名： 英文名：Seon a Kim 生日：1975年10月1日 星座：天秤座 国籍：韩国 地域：亚洲 身高：171cm 血型：O型 三围： 嗜好：唱歌, 跳舞, 电话聊天 特长: 钢琴, 游泳, 旱冰 习惯: 善于模头发 信仰: 随丈夫 学历：庆大私大附属小学 \\\/ 日本台东区立忍冈中学 \\\/ 日本东京韩国学校高中部毕 \\\/ 美国Ball State University音乐系钢琴科3年级休学中 座右铭：天天都快乐地生活 圈内好友：金媛熙、金晶恩、金智英、成时景、李娜英、李承焕、蔡琳 生平介绍： 金善雅号称韩国的喜剧女王，出道已整整8年。
她出生于1975年，在日本读完初中和高中，而后到美国的一所大学攻读钢琴专业。
1996年暑假时金善雅回国小住几日，其间禁不住一个做模特的朋友的央求，代替她做了一天模特，没想到这件事成了她人生的转折点。
一天的模特工作给金善雅带来了乐趣，但假期结束后她还是回到美国继续学习，并计划不久后赴维也纳深造。
虽而虽然远在美国，天生丽质难自弃的她依然受到了许多广告公司和电台的合作邀请，渐渐地金善雅放弃了钢琴，转入了表演这个行当。
演出作品： 电影 2005年潜伏勤务 2004年S日记 2003年快乐圣诞节 2003年伟大的遗产 2003年黄山伐 2002年梦精记 2001年Yesterday 电视剧 2005年MBC《我的名字是金三顺》 2001年~2000年MBC《黄金时代》 2000年SBS《好男好女》 1999年SBS《向日葵》 1998年MBC《直到人世尽头》 1998年MBC《她的花盆NO.1》 1998年MBC《那年冬天的白天风景》 1998年SBS《赌徒》 金善雅中文网： 你可以去找自己感兴趣的资料
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车臣共和国位于俄罗斯联邦西南部高加索山脉的北侧，南面与格鲁吉亚隔山为邻，北同俄罗斯的斯塔夫罗波尔边疆区接壤，面积近2万平方公里。
车臣占据的地理位置具有重要的战略意义，它不仅连接着俄罗斯同南高加索三个共和国的石油管道和铁路干线，而且同周围几个穆斯林人口比例很大的共和国有着千丝万缕的联系。
车臣共和国有人口120多万(1994年)。
主要民族：以穆斯林族为主，信奉伊斯兰教，还有俄罗斯族。
首府：格罗兹尼，人口40.1万(1989年)。
1997年1月23日，车臣总统扬达尔比耶夫宣布，为纪念焦哈尔· 杜达耶夫而将车臣首府格罗兹尼更名为焦哈尔—加拉，1998年3月25日车臣议会批准这一决定，但外界媒体仍用格罗兹尼这一名称。
工业：石油开采、石油加工、化学、机器制造、建筑材料、食品、木材加工等。
农业：种植小麦、水稻、玉米、大麦、向日葵、甜菜、蔬菜。
还有园艺业和葡萄种植业。
简史：有关车臣人的最早记载是在7世纪初以前。
车臣人素以英勇善战著称，民族意识极强。
在十九世纪上半叶，沙俄经过40多年的高加索战争，才于1859年把车臣并入沙俄帝国版图。
在苏维埃政权时代，车臣自治区于1922年11月30日成立，属俄罗斯联邦。
1934年1月15日车臣与其西邻的印古什自治区合并成立车臣-印古什自治区，1936年12月5日改为加入俄罗斯联邦的自治共和国。
1944年，苏联政府以车臣人同德国侵略者合作为由，把车臣人强行迁出家园，直到1957年车臣才恢复民族自治。
政治：1990年，代表车臣民族的杜达耶夫将军当选为苏联全国代表大会执委会主席。
1991年“8·19”事件后，杜达耶夫于同年9月6日推翻了当地的苏维埃政权，一个月后当选为车臣总统。
1991年11月，车臣宣布成立独立的共和国，杜达耶夫任总统。
1992年1月20日，俄议会通过决议，同意车臣自治共和国升格为车臣共和国。
杜达耶夫执政后，一直采取与俄罗斯政府对抗的行为。
从1994年12月开始，俄罗斯联邦当局对车臣采取军事行动，至1995年4月经历了4个多月的残酷战争。
1995年4月5日，俄军夺取了杜达耶夫支持者占据的最后两个重要基地古杰尔梅斯市和沙利市，这意味着车臣境内已不存在发生大规模武装冲突的“策源地”。
战斗从城市转向农村、森林和山区。
俄在清剿车臣非法武装的同时，还进行在车臣建立符合俄宪法的权力机关的工作。
1994年底成立的民族复兴政府于1995年1月5日进入车臣开始工作,由车臣的印古什人哈吉耶夫担任政府总理。
1月9日，俄军占领车臣“总统府”。
3月23日，叶利钦再次签署命令，在车臣成立共和国民族和睦委员会，促进在车臣建立符合宪法的权力机关。
从车臣问题一出现，联邦中央机构内就对使用武力还是通过谈判解决这一危机存在分歧。
车臣危机给俄政治、经济、社会带来了长期影响，战争使车臣经济濒临崩溃。
据专家估计，恢复其经济至少需要15亿美元。
俄联邦政府成立了以第一副总理索斯科韦茨为首的恢复车臣经济和社会活动国家专门委员会，截至1995年4月11日，已向车臣提供了2万亿卢布的援助。
1995年12月8日，俄罗斯总理切尔诺梅尔金、车臣共和国总理扎夫加耶夫和俄罗斯总统驻车臣全权代表洛博夫签署了车臣在俄联邦内特殊地位的协定。
协定规定，车臣共和国有权参加国际交往和对外经济联系，并可以制定自己的宪法和法律。
在1995年12月14日至17日举行的选举中，车臣共和国总理扎夫加耶夫当选为共和国元首。
经过1994年12月—1996年8月近两年的独立战争后，车臣享有事实上的独立。
两小时预算和十年代价 1994年12月11日，俄罗斯总统叶立钦签署了第2169号总统令《关于在车臣共和国境内保障法制和社会安全的措施》。
这一天黎明，俄罗斯大军浩浩荡荡，西自弗拉季高加索，北自莫兹多克，东自达吉斯坦三个方向开入车臣，围困格罗兹尼，逼迫与联邦政府作对的杜达耶夫政权及其军队自动解除武装。
殊未料到，战争刚一打响，俄罗斯联邦军队就蒙受了奇耻大辱：以坦克开路的联邦军队在车臣境内遭遇了猛烈的抵抗和防不胜防的打击。
正所谓“杀敌三千自损八百”，开战后两个月间，按照官方数字，车臣方面丧生者为6600到15000人，而俄军的阵亡或失踪数字则为1500人。
俄罗斯军方承认，攻入格罗兹尼的第131独立摩托化旅和第81摩托化步兵团全军覆没，并有100多士兵被俘。
当车臣人把被俘俄军士兵的录像带在电视台播出后，最难堪的恐怕就是叶立钦总统和他的国防部长格拉乔夫。
格拉乔夫将军在准备出兵车臣之前的那句名言，成为十年来交战双方将士私下的笑柄：“只需一个空降团，两小时就能拿下格罗兹尼，解决所有问题。
” 两小时的预算和十年的代价，为何如此失算
今天在莫斯科，人们仍然在质问：当年是否应该对车臣大动干戈，以至造成数以万计俄军官兵阵亡、高达18万车臣人丧生（其中多为平民，武装分子不到三分之一）和格罗兹尼十室九空的悲惨结局
2004年12月9日，前苏联总统戈尔巴乔夫就车臣战争十周年发表讲话：“尽管当时在车臣发生的事情不能不令人担忧，但这些问题并非典型，出兵进入车臣共和国完全是不适当的方式。
这巨大的悲剧性错误既导致了第二次车臣战争，后来又导致恐怖战争。
” 从第一次车臣战争中俄军被动挨打败绩累累，到列别德将军与马斯哈多夫签署停火协议；从普京决定打响第二次车臣战争，直至发生了2002年10月的莫斯科人质事件和2004年9月的别斯兰人质事件，从莫斯科到世界各地，呼吁政治解决车臣问题的声音一直不断。
许多人至今还在假设，如果十年前莫斯科不出兵车臣，今天的局面会否更好些
车臣人反抗俄罗斯的历史 车臣人反抗俄罗斯人的历史可以追溯到1560年代，那是俄国历史上著名的伊凡雷帝时代。
沙皇大军首次踏足北高加索地区，征服切尔克斯和卡巴尔达公国，在北高加索建立俄罗斯人的城镇和居民点。
当时，在沙俄与土耳其奥斯曼帝国的领土争霸中，夹在两大帝国之间的高加索，具有重要战略意义。
1722年－1723年，彼得大帝夺取了波斯人在高加索的地盘，征服了里海沿岸，在今天达吉斯坦共和国首府马哈奇卡拉附近建立了彼得罗夫斯克港口。
奥斯曼帝国在1585年征服车臣，并令车臣人皈依了伊斯兰教。
1774年，沙俄帝国打败奥斯曼帝国夺回车臣。
十年之后，车臣人参加了民族领袖曼苏尔领导下的反抗俄罗斯大起义。
但是七年之后曼苏尔被俘，车臣输掉了关键性的战役。
沙皇派军队镇压后，开始在该地区修筑连环军事要塞，派驻重兵。
正是在普希金和莱蒙托夫浪漫主义诗歌盛行的时代，沙俄军队对高加索开始了将近半个世纪的第四次征服战争，高加索各民族最终在1862年宣告俯首称臣，但不屈的车臣人却屡败屡战起义不断。
据史书记载，通常每半个世纪爆发一次车臣战争，每次持续6年到25年。
与欧亚历史上诸多王朝一样，沙俄和苏联的历史就是扩张征服的历史，而在被征服的地区中，没有哪一个民族像北高加索山民那么骁勇善战，更鲜见车臣人那般暴戾凶猛桀骜不驯的部族。
俄国十月革命后，车臣在1918年加入北高加索联邦共和国，受到欧洲国家和俄国布尔什维克政权承认，但是苏俄在1920年直接入侵并占领了北高加索联邦。
车臣人在1929年和1940年发动过两次大起义，均被残酷镇压。
为分化瓦解车臣民族，斯大林在1944年下令押送50万车臣人移居哈萨克斯坦，直到1957年赫鲁晓夫当政时，车臣人才被准许返回故乡。
此后30多年间，车臣同苏联其它地区一样，在和平中取得了经济建设的进步。
车臣失控导致俄京发兵 1980年代末，苏联大厦的结构性动摇在车臣引起骚动。
1990年11月25日，包括俄族在内的车臣共和国各民族代表在首府格罗兹尼成立了“车臣全国大会”，选举了第一个当上苏联将军的车臣人、战略空军师师长杜达耶夫担任大会执行委员会主席，并通过决议，宣布车臣脱离苏联独立建国。
当时，在这个小小的“车臣－印古什共和国”所发生的事情，并没有被焦头烂额的克里姆林宫所重视。
车臣的社会动乱危机就从那时开始。
头脑发热的苏共车臣－印古什州委第一书记扎夫加耶夫亲自宣布车臣－印古什为主权国家，并为自己设立了共和国总统的职位。
由于莫斯科出现混乱，车臣在1991年8月发生暴动：车臣－印古什政府支持了莫斯科紧急状态委员会，而杜达耶夫为首的人民大会则站在叶立钦一边。
双方对峙的结果是，杜达耶夫宣布共和国最高苏维埃被推翻，声称车臣应该与印古什分开，选举自己的议会和总统。
10月27日，杜氏当选为“车臣共和国总统”。
几天后，俄罗斯联邦总统叶立钦签署在车臣－印古什实行紧急状态的命令，杜达耶夫于是宣布共和国戒严，并给车臣人发放武器。
1991年底苏联解体后，车臣一直没有签署加入俄罗斯联邦的协议。
其后两年，莫斯科忙于应付自己的“休克疗法”式改革所引发的灾难而无暇他顾，实际上承认了车臣的自主地位和杜达耶夫的总统地位。
俄罗斯人民代表大会还在1992年通过法律，承认车臣和印古什分别组建两个共和国。
同年6月初，联邦军队全部撤出车臣，给杜达耶夫留下了原本部署在那里的所有武器，包括260架教练飞机、42辆坦克、34辆步兵装甲车、139门大炮、2500支自动步枪和27车皮的弹药。
用俄罗斯将军特罗舍夫的话说，“这些武器足够装备一个小国家的军队。
” 1993年4月，杜达耶夫解散车臣议会宣布掌握国家大权，反对派则组织了共和国临时委员会。
车臣内讧导致社会失控，支持和反对杜氏的军队开战，匪帮遍地横行，恐怖事件层出不穷，当地俄族人频繁地成为盗匪的牺牲品。
车臣成了罪犯的天堂，伪造银行证件等诈骗行为从那里散向北高加索乃至全俄各地。
庸官使将士成为“葬品” 在整个俄罗斯都在经济改革失利的懊恼中找不到方向之时，克里姆林宫的主人对于车臣问题的无知，俄罗斯军方对车臣战局的错判，都为其后漫长的车臣战争埋下了伏笔。
据俄罗斯时事评论员、前《消息报》副总编辑姆列钦透露，就在车臣战争开打之前几天，杜达耶夫还在印古什会见过联邦国防部长格拉乔夫和内务部长叶林，表示车臣和联邦政府可以就权力划分问题进行广泛谈判。
其实并非帅才的杜达耶夫将军只是希望叶立钦能够亲自接见他，以便满足荣誉感。
但叶立钦没有理会杜达耶夫，因为在那时，感到蒙受了耻辱的叶立钦已经暗中准备采取军事行动。
1994年11月26日，40辆坦克佯装反对派武装开到格罗兹尼市中心，立刻被杜达耶夫武装的榴弹炮所歼灭。
年轻的坦克兵成了俘虏，承认受联邦反间谍局指派。
车臣人找来电视记者拍下被俘官兵的口供，国防部长格拉乔夫还矢口否认那些小伙子是自己的子弟兵，丢尽了莫斯科的颜面。
同一天，当时的俄罗斯联邦安全会议开会讨论如何进攻车臣。
《劳动报》报道，时任联邦民族地区政策部长的叶戈罗夫对形势十分乐观，声称“有七成车臣人盼望俄罗斯军队进入，另外三成基本保持中立，只有叛军会进行抵抗。
”甚至吹牛说，车臣民众将会“箪食壶浆以迎王师”，以传统的撒面粉在道路上的最隆重形式欢迎俄军
尽管国防部长格拉乔夫也曾表示出兵时机不成熟，联邦安全会议还是做出了派兵决定。
而本来不失为一个出色军人的格拉乔夫，为了在总统面前表现勇敢并在军中加强自己的地位，当叶立钦问他进攻车臣需要几天时间准备时，竟然脱口而出说：“三天。
” 转变为恐怖主义战争 车臣战争开打半年之后，车臣军队被联邦军队逼迫到南部山区格鲁吉亚边境一带。
就在此时，一个名叫沙米尔•巴萨耶夫的叛军将领宣布，将把战场转移到俄罗斯领土上，迫使莫斯科回到谈判桌前。
胜利在望的俄罗斯军方，并没有对这个巴萨耶夫的言论过于重视，他们想的只是乘胜追击。
殊不知，巴萨耶夫的言论，正是对莫斯科发表的恐怖战争宣言。
接下去让全世界都看呆了，虽然联邦军队成功地在1996年4月22日用火箭击毙了杜达耶夫，但车臣独立运动中的极端分子也多次成功地在车臣境外周边地区制造了恐怖事件： 1995年6月14日，巴萨耶夫的队伍在斯塔夫罗波尔边疆区布琼诺夫斯克市劫持了1500多名人质。
巴萨耶夫要求莫斯科从车臣撤军并就车臣独立问题进行谈判。
为表明自己的“严肃性”，他第一天就杀了6名人质，第二天又杀了5名。
联邦反间谍局和特种部队的营救行动失败，又有30名人质丧生，最后只好与巴萨耶夫电话谈判，达成停止军事行动的意向。
1996年1月9日，原苏联共青团车臣－印古什州委巡视员拉杜耶夫率领部队攻击达吉斯坦城市基兹利亚尔。
他们突袭军用机场后，又在城内劫持了2000名人质。
这起事件持续了40多天，11名人质死亡。
...... 叛军的四处出击，真的把莫斯科逼回到谈判桌上。
经过两轮谈判后，在1996年8月30日签署了在格罗兹尼和车臣境内停火的协议，双方同意在5年内解决车臣主权定位问题。
接着：1996年12月31日，所有联邦军队从车臣撤出。
1997年1月27日，车臣举行总统和议会大选，反政府武装领导人马斯哈多夫击败其他15名候选人，当选车臣总统。
1997年5月12日，叶立钦和马斯哈多夫在克里姆林宫签署了《俄罗斯联邦和车臣伊契凯尔共和国双边关系准则与和平的协议》。
但是，经过第一次车臣战争的那片土地，已经成为烂摊子——战火留下的废墟，可以重新建设恢复；人心造成的混乱，却成为社会的毒瘤。
以支持车臣民族独立为由进入高加索的各国“圣战者”，已经把车臣变成他们的活动大本营和训练基地。
瓦哈比教派在车臣民间广泛建立自己的组织和学校，本•拉登的基地组织和阿富汗塔利班政权和车臣武装密切交往，互相支持。
而格罗兹尼的马斯哈多夫政权显然无法整合停战后的共和国。
以巴萨耶夫为司令的恐怖主义别动队并未“食言”，他们终于把战火烧到了俄罗斯腹地，把炸弹安到了莫斯科。
1999年8月－9月，从莫斯科市中心购物中心到高层居民大楼，一连串的剧烈爆炸造成近千平民伤亡，激起了俄罗斯民众愤怒，打碎了俄罗斯高层的和平幻想。
9月底，时任政府总理普京主导联邦军队再次进入车臣境内，爆发了第二次车臣战争。
同年12月，俄军与车臣武装开始了激烈的格罗兹尼争夺战。
2000年2月7日，国防部长谢尔盖耶夫宣布“格罗兹尼完全解放”。
“八国联军”战车臣 据北高加索军区反恐新闻发言人公布，在第二次车臣战争开始后的三年间，联邦军队击毙了500多名来自阿拉伯国家的匪徒，而在制造2004年9月别斯兰人质事件的匪徒中，也有阿拉伯枪手。
这些人都是谁
他们为何要把性命舍弃在异国土地上
据《车臣旧病复发—总司令笔记》的作者特罗舍夫上将称，这些外国雇佣军的存在，充分证明车臣早已是“全球圣战”的战场之一。
俄罗斯军队在车臣领土上与之作战的对手，事实上是国际恐怖主义联军。
很多文件也都证明，大批打着“援助穆斯林兄弟”和“为伊契凯尔独立”而战的外国人，是全球恐怖主义集团派到车臣的。
更有些国家和集团为了自己不可告人的目的，暗中资助外国雇庸军，阻止车臣局势稳定。
某些国家企图在高加索把自己的政治经济利益变为现实，热衷于在当地非法武装组织中寻找“自己人”做领袖。
正是由于国外输入车臣的金钱，才保证了各类组织的存在和活动。
而瓦哈比组织的架构，主要就是由外国人组成，大多是阿拉伯人。
今日车臣境内的大量外国人，是在苏联解体后通过当时失去警戒的边界线，从格鲁吉亚和阿塞拜疆越境进入车臣的。
在第一次车臣战争中，最著名的外国雇佣军部队叫做“法赫特营”，由土耳其人、约旦人、黎巴嫩和其它国家公民组成。
1996年还有200多名外国穆斯林“志愿者”站在车臣叛军一边，同俄罗斯军队作战。
他们分别来自波斯尼亚穆斯林、阿尔及利亚的“埃米尔•阿布德•卡德尔”、叙利亚的“叙利亚伊斯兰解放军”、沙特阿拉伯的“伊斯兰革命组织”和也门的“哈利法•拉西德战士”等伊斯兰极端组织。
据当局透露，在车臣同俄罗斯军队作战的，还有塔吉克人、乌兹别克人、克里米亚鞑靼人、阿尔巴尼亚人和来自中国新疆的维吾尔人。
俄罗斯反间谍部门还曾经在车臣境内发现了由美国和英国人操作的电台。
在无线电侦查与反侦查战斗中，俄罗斯侦听部门收听到纯正的美国英语和不列颠英语，叛军领袖能够取得北约卫星侦查情报。
甚至在叛军队伍中，经常能够看到西欧人面孔。
车臣出路何在
还能打多久
1950－1980年代生活在格罗兹尼的居民，不论是车臣人、俄罗斯人、亚美尼亚人，还是犹太人，都记得各族人民友好相处的情景。
当时在格罗兹尼的一个广场上，有一座“三勇士纪念碑”。
那是一组雕塑群像：十月革命时期和国内战争时期的三名勇士：尼古拉•吉卡洛（俄罗斯人）、阿斯兰贝克•谢里波夫（车臣人）和加普尔•阿赫里耶夫（印古什人），肩并肩挺立于纪念碑基座上。
1990年代的战争毁坏了那座纪念碑，但并没有毁掉那段和睦时期的记忆。
从某种意义上看，世界各国的历史学家和国际问题观察家都说得不错：从叶尔莫洛夫到贝利亚（1943年奉斯大林旨意强行把车臣印古什居民流放到哈萨克斯坦的执行者），他们给高加索人民带来了苦难和仇恨。
但在另一方面，从沙皇到苏联到新俄罗斯的领袖们，大俄罗斯也一直在努力化解高加索山民的仇恨，莫斯科为此投入了大量金钱，以求稳定南部边境的局面。
再换言之，人类生存法则是无情的，民族生存法则又何尝能够例外
无论是从俄罗斯与其它大国争夺高加索主权的历史，还是从更宏观的人类发展史上看，今天的世界地缘政治版图多是强国争霸兼并的结果。
一个弱小的民族和地区，能够脱离大国的羽翼而独立生存吗
当车臣人要求独立的呼声和运动再次出现高潮时，一位普通的车臣乡村教师，在《车臣之声报》上发表了一篇文章，表达了一位现实的车臣知识分子的现实观点，对那些寻求独立的同胞说：“请不要忘记，在我们脚下是土地，在我们头顶是天空，而在我们周围，是俄罗斯......” 那晚，在北高加索军区42师军官宿舍，我打开电视，看到普京总统正在德国回答记者问题。
当一个记者问到车臣战争时，普京回答说：车臣战争已经结束，因为那里早在三年前就没有了大规模军事行动。
在车臣战争十周年之际，伊万诺夫国防部长在2004年12月10日宣布，已经到了从车臣撤军的时候。
车臣战争结束了
就这样没有任何协议没有任何结论地结束了
“战壕将军”特罗舍夫感叹：战争由政治家开始，战争由政治家结束。
克里姆林宫当然急于甩掉车臣战争的包袱，但是在车臣内外，更有许多政治家和非法武装的司令们，不希望结束战争。
只有车臣处于分崩离析的战争状态，甚至把战火烧到北高加索其它地区，这些阴谋家的个人利益才能够持续下去。
虽然在战争十年之际，从欧洲自由之声电台到华盛顿邮报，分别发表了马斯哈多夫的代表扎卡耶夫和前“外交部长”阿赫马多夫的谈话和文章，呼吁莫斯科坐下来谈判，但是普京政府并未做出任何响应。
单方面宣布停火，单方面呼吁谈判，车臣的游戏仍然没有最后结束。
俄罗斯外交部国际关系学院教授马拉申科在车战十周年之际发表谈话指出，军事手段改变不了车臣的根本局面，无论谁跟谁，或迟或早总要谈判。
他举例说，从1917年开始的车臣对苏联的抵抗，直到1940年5月才被成功地平息下去。
最后他引用卡德罗夫被炸身亡之前说过的那句话：“武装对抗还会持续20年。
”参考资料：
super junior的五辑里A,B,C版中都有哪些歌
A:1. Mr. Simple2. 오페라 (Opera)3. 라라라라 (Be My Girl)4. Walkin’5. 폭풍 (Storm)6. 어느새 우린 (Good Friends)7. 결투 (Feels Good)8. 기억을 따라 (Memories)9. 해바라기 (Sunflower)10. 엉뚱한 상상 (White Christmas)11. Y12. My Love, My Kiss, My Heart[Bonus Track]* 태완미(太完美_Perfection) (Sung by Super Junior-M)A版介绍：《Mr. Simple》用诙谐隐喻的手法描写了现代人因生活在复杂繁忙的现在，毫无闲暇心情，丧失了对工作、对爱情或对梦想的激情的真实一面。
不管是音乐还是编舞都强烈表现出Super Junior的独特魅力，带给人华丽的视觉享受，相信届时一定能吸引全世界Super Junior粉丝的目光。
主打歌「Mr. Simple」由「Sorry Sorry」「Bonamana」作曲家刘英振创作尹钟信创作的《Good Friends》讲述了Super Junior成员们初次邂逅，积累友情的故事，是一首歌词与旋律完美集合的感性歌曲。
《Opera》则是一首有着强劲节奏的舞曲，歌词犹如在讲述成长为世界级人气歌手Super Junior的现下状态，给人留下了深刻的印象；此外流行舞曲《Walkin》把切实描写成员们战胜一个又一个困难时常以积极向上的心态面对一切的歌词，动人的旋律和节奏相结合，完美再现了Super Junior的生活，增添了一份趣味和感动。
东海和Chance合作曲词的《Y》描绘了分手后怀念恋人的哀切心情，是一首充满R&B风格的抒情歌曲，也让人看到了东海更加成熟的音乐实力。
Super Junior还翻唱了智努Jinu 1996年的《出格的世界》，夏季祈祷白色圣诞节的谐趣歌词，欢快的摇滚音乐与Super Junior独特的愉悦氛围相碰撞，绝对是今夏一大消暑圣品。
此外，新专辑中还收录了Super Junior K.R.Y演唱的R&B歌曲《My Love、My Kiss、My Heart》朴俊秀作曲家创作的《跟随记忆》、舞曲《Be My Girl》、《Feels Good》，以及Super Junior-M的《太完美》在内共13首歌曲，突显成员们的多变曲风和魅力。
B:1. SUPERMAN(新歌）2. Mr. Simple3. 오페라 (Opera)4. 라라라라 (Be My Girl)5. Walkin’6. 폭풍 (Storm)7. 어느새 우린 (Good Friends)8. 결투 (Feels Good)9. 기억을 따라 (Memories)10. 해바라기 (Sunflower)11. 엉뚱한 상상 (White Christmas)12. Y13. My Love, My Kiss, My HeartC:1. SUPERMAN2. A-CHA3. Mr. Simple (3:59초)4. Oops!! (Feat. F(x))5. 하루에 (A Day)6. 안단테 (Andante)7. 오페라 (Opera)8. 라라라라 (Be My Girl)9. Walkin’10. 폭풍 (Storm)11. 어느새 우린 (Good Friends)12. 결투 (Feels Good)13. 기억을 따라 (Memories)14. 해바라기 (Sunflower)15. 엉뚱한 상상 (White Christmas)16. Y17. My Love, My Kiss, My HeartC版介绍：《A-CHA》以摇滚为基础，打造全新电音HOUSE新风格，由人气作曲家hitchhiker执笔。
简单的旋律与洗练的节奏感，描绘唐吉坷德式爱情的歌词创造出与过往Super Junior曲风不同的音乐，让众人期待他们的新舞台。
另一首歌曲《Oops!!》由利特、希澈，神童、东海和银赫直接营造Rap节奏，旋风口舌加上诙谐歌词打造Super Junior独特音乐氛围此外，利特与Super Junior-M一员亨利的自创曲《Andante》则叙述了与恋人不变爱情的约定。
而坦率直白的歌词与感性音乐结合的抒情曲《一天》则彰显了Super Junior日渐成熟的音乐风格，相信届时一定能获得不少粉丝的喜爱。
打了好多呢
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