篇一：浙江大学生物传感器实验报告
实 验 报 告
生物传感器 与测试技术
课程名称 生物传感器与测试技术 姓 名 徐梦浙学 号 专 业 生物系统工程指导老师 王建平/叶尊忠
一 热电偶传感器实验
一、 实验目的：
了解热电偶测量温度的原理和调理电路，熟悉调理电路工作方式。
二、 实验内容：
本实验主要学习以下几方面的内容 1. 了解热电偶特性曲线；
2．观察采集到的热信号的实时变化情况。 3. 熟悉热电偶类传感器调理电路。
三、 实验仪器、设备和材料：
所需仪器
myDAQ、myboard、nextsense01热电偶实验模块、万用表
注意事项
五、 在插拔实验模块时，尽量做到垂直插拔，避免因为插拔不当而引起的接插件插针弯
曲，影响模块使用。 六、 禁止弯折实验模块表面插针，防止焊锡脱落而影响使用。 七、 更换模块或插槽前应关闭平台电源。 八、 开始实验前，认真检查热电偶的连接，避免连接错误而导致的输出电压超量程，否
则会损坏数据采集卡。 九、 本实验仪采用的电偶为K型热电偶和J型热电偶。
十、 实验原理：
热电偶是一种半导体感温元件，它是利用半导体的电阻值随温度变化而显著变化的特性实现测温。
热电偶传感器的工作原理
热电偶是一种使用最多的温度传感器，它的原理是基于1821年发现的塞贝克效应，即两种不同的导体或半导体A或B组成一个回路，其两端相互连接，只要两节点处的温度不同，一端温度为T，另一端温度为T0，则回路中就有电流产生，见图50-1（a），即回路中存在电动势，该电动势被称为热电势。
图50-1（a） 图50-1（b）两种不同导体或半导体的组合被称为热电偶。
当回路断开时，在断开处a，b之间便有一电动势ET，其极性和量值与回路中的热电势一致，见图50-1（b），并规定在冷端，当电流由A流向B时，称A为正极，B为负极。实验表明，当ET较小时，热电势ET与温度差（T-T0）成正比
十一、 实验步骤：
十二、 关闭平台电源（myboard），插上热电偶实验模块。开启平台电源，此时可以看到
模块左上角电源指示灯亮。
十三、 打开nextpad,运行热电偶实验应用程序
十四、 查看传感器介绍，了解热电偶的原理及温差与热电势之间的关系。
十五、 在特性曲线页面。选择不同型号的热电偶观察各型号热电偶的V-T，在测温曲线的
下方，手动模拟产生热电势的.值，观察测温曲线。
十六、 在实验内容页面中了解实验的内容、操作方式和过程
十七、 在仿真页面任意改变运算放大器的输出电压值和运算放大倍数，记录E（T,T0）和
冷端温度仿真的输出值E（T0），将数据填写到热电偶温度手动测量表中，查表计算热电偶的电势所对应的温度值。 十八、 在测量页面
十九、 选择实际接入的电阻
二十、 在nextsense01中，用杜邦线将R2 R4链接到运算放大器上。
二十一、 调零。将A、B端用杜邦线短接，调节模块右侧下方的电位器，对放大器的输
出Vout进行调零。 二十二、 测量。选择K型或者J型热电偶其中一个，连接到A、B两端，在自动测量页
面，点击页面上的开始按钮进行数据的采集和记录，将热电偶放置到热水中记录温度的变化（温度变化范围至少30度）。 二十三、 在nextpad页面中，点击页面右上的数据保存按钮，选择保存的表格，进行数
据的保存。
二十四、 数据及结论（绘制数据点散图，建立回归方程，分析灵敏度和线性误差）
冷场温度 热电偶输出电势（uV） 20.64 3543.21 20.65 3500.6 20.65 3731.66 20.65 3730.34 20.64 3797.56
测量点温度
87.59 86.81 91.08 91.06 92.3
温度差 66.95 66.16 70.43 70.41 71.66
20.64 20.65 20.65 20.65 20.64 20.65 20.65 20.66 20.66 20.65 20.66 20.65 20.66 20.64 20.66 3815.1 3561.15 3491.3 3509.37 3463.48 3472.74 3514.91 3535.65 3585.15 3601.62 3544.6 3443.76 3421.89 3410.39 3461.66 92.62 87.93 86.63 86.97 86.11 86.29 87.07 87.46 88.38 88.68 87.63 85.76 85.36 85.13 86.1
71.98 67.28 65.98 66.32 65.47 65.64 66.42 66.8 67.72 68.03 66.97 65.11 64.7 64.49 65.44
结论：
实验表明，当ET较小时，热电势ET与温度差（T-T0）成正比，被测传感器的比例系数为54.020。根据半导体的电阻值随温度变化而显著且有规律变化的这一特性，可以实现测温功能。
篇二：大学生物实验论文要领
白色背景
题目：用短语，不用句子：……的研究，不要用学科题目作标题；英文：A study of…… 通讯作者：BOSS，支持者
摘要：目的、方法、结果、结论。不宜举例，不用引文。英文摘要调整一下，符合英文顺序。关键词：分子式、化学式不作为关键词，要写全名。常规技术不做关键词如离心，英文关键词用,隔开
前言：常见的引言包括以下内容：
1 提出课题的现实情况和背景；
2说明课题的性质、范畴及其重要性，突出研究的目的或者需要解决的问题；
3 前人研究成果及其评价；
4 达到研究目的的研究方法和实（试）验设备；
5 研究工作的新发现。
研究背景理论依据（XX是什么，研究进展，实验原理包括方法原理、实验对象原理即为什么选这两个对象，有无关联，判断原理的依据）、研究目的（要解决什么问题）、研究方法（怎样研究）400-500字左右，文献综述包括在前言里。
写前人……本研究……希望得到……的结果
材料：写主要的，例如树脂，Tris，其他就写国产分析纯，如NaCl，烧杯、试管不写
方法：众所周知的方法不写，如离心。写出方法名字，注明参考文献，重点写改进方法。例如：提取效果为……的电泳进行检测
结果：比例尺、图标、放大倍数；不进行评论评价分析讨论，实验结果不要原始浓度，电泳的各个泳道是什么一定要写出来。洗脱图自己重新做一个，标注单位。柱层析的峰要写标号，注明是什么蛋白。
结论：实验表面结果，反映了什么现象。相同因素之间，不同因素之间。方法怎么样。 讨论：得到这样结果的可能原因，原因大小程度。建议、改进可放分析讨论。1讨论为什么会出现这样的结果出现意味了什么？用理论解释。2比较与前人异同（异：解释差异；同：更加证明）3研究有什么新发现，可能的原因4实验的不足
其他：同一结果图表不共存，如果图不能直接说明可以附上表，图上无多余的线，违反总体趋势的个别点可以去掉。折线图横轴按实验进行顺序编写。小数点位数保持一致。 （适用于细胞生物学及植物生理学）
微生物及生物化学有待补充。。。
致谢：协助、资金支持，200字
生化海报：IgG与别人标准进行比较，pro标准曲线不过0点，标准pro只有280nm，几个样都要算。
图名称包括：方法、目的、对象
电泳：上样顺序、其他分子量、marker分子量、分析趋势（迁移率一般达不到0.999） 紫外：峰1，峰2，那个是我们的
写分析不写说明，与其他步骤联系起来，层析与电泳联系起来说明
分析：最后有结论，浓度、回收率提取出来，图有序列关系，按实验进行顺序
海报一般是竖的，存PDF或图片
分析讨论对结果讨论，对别人展示好的一面，不是注意事项
要有说明，表名称，要有整体联系性。
篇三：大连理工大学 生化实验报告——模版(新)
小牛肠碱性磷酸酶的提取及酶活测定、
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量、
SDS-PAGE电泳法测定蛋
摘要 本实验通过从小牛肠中提取小牛肠碱性磷酸酶，利用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量，并测定酶的活性。最后通过SDS-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量.
关键词 小牛肠碱性磷酸酶提取 酶活测定 考马斯亮蓝法 SDS-PAGE电泳法
本实验分为三部分。先通过对牛小肠内膜的刮取，离心，沉淀析出等方法，提取牛小肠碱性磷酸酶；然后用考马斯亮蓝G-250与碱性磷酸酶结合，利用紫外分光光度计在一定波长下测定结合物的吸收波长，根据其吸光度与蛋白质结合物的含量成正比的关系测定蛋白质含量，进而测定出蛋白质的比活力；最后，通过SDS-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量，分析所获得的电泳结果来推算出被测蛋白质分子量的近似值。
1 实验部分
1.1 试剂与仪器
1.1.1小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活测定
1、 试剂
（1）正丁醇、丙酮（置-20℃冰箱保存）
（2）1mol/L醋酸（HAC）、1mol/LNaOH、硫酸铵
（3）平衡缓冲液：0.01mol/LTris-HCL,PH 8.0,(含1.0×10-3mol/LMgCl2和1.0×10-5mol/LZnCl2)。
（4）底物缓冲液：1mol/L二乙醇胺-盐酸缓冲液（PH9.8，含0.5×10-3mol/LMgCl2）。
（5）酶的底物溶液：用底物缓冲液配制15×10-3mol/L对硝基苯磷酸二钠溶液。（已加入底物缓冲液中）
2、仪器
匀浆机、冷冻离心机、恒温水浴、紫外可见分光光度计、离心管、剪刀、载玻片、不锈钢盘、搪瓷盘、滤布、漏斗、分液漏斗、量筒、烧杯、移液枪、比色皿
1.1.2考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
1、试剂
考马斯亮蓝、实验小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活测定所得酶液、生理盐水
2、仪器
分光光度计、分析天平、玻璃比色杯、试管及试管架、移液枪
1.1.3 SDS-PAGE电泳法测定蛋白质相对分子质量
1、试剂
1）30%丙烯酰胺（acrylamide,Acr）置棕色瓶。
2）分离胶缓冲液：1.5mol/LTris-HCL缓冲液，pH8.8，已加入10%SDS。
3）浓缩胶缓冲液：0.5mol/LTris-HCL缓冲液，pH6.8，已加入10%SDS。
4）10%过硫酸铵（AP）（小离心管装，提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺的聚合所必须的自由基，须新鲜配置。）
5）TEMED（四甲基乙二胺）（小离心管装T，通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺和双丙烯酰胺的聚合）
6）上扬缓冲液（小离心管装S）：称100mgSDS、2mg溴酚蓝、2g甘油，加0.1mL巯基乙醇、2mL-。-5mol/LpH8.0Tris-HCL,加超纯水定容至10mL。
7）染色液：配置含0.1%考马斯亮蓝R250,40%（体积分数）甲醇和10%（体积分数）冰醋酸的染色液500mL，过滤后备用。
8）脱色液：500mL10%（体积分数）甲醇和10%（体积分数）冰醋酸的脱色液1000mL。
9）电泳缓冲液（含0.1%SDS，0.05mol/LTris，0.384mol/L甘氨酸pH8.3）.
2、仪器
电泳仪、电泳槽、制胶板、摇床、移液枪
1.2 实验过程
1.2.1小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活测定
1、酶的分离提纯
1）取新鲜小牛肠，用剪刀纵向剖开，用载玻片刮去小肠内粘膜，放到盘子一角。
2）统一将小肠黏膜液集中倒入匀浆机中，加1.5倍体积冰冷蒸馏水，高速匀浆15s，重复20次。
3）缓慢加入（总体积）1倍体积的冰冷正丁醇，高速匀浆15s，重复20次。
每组领取60mL的匀浆液，放入离心管中（离心管装液量不能超过70%），用另一离心管用水配平（切记离心前连同离心管盖子一起用天平配平），在4℃条件下，10000rpm，离心15min（离心管对称放置）。
4）用滤布过滤去除杂质（滤饼），倒入分液漏斗中，静止分层（勿摇），去下层水相，用1mol/LHAc调pH到
4.9。4℃，10000rpm，离心10min。
5）得到上清26.5mL，放入离心管中，用1mol/LNaOH调pH至6.5，称取质量为溶液体积5%的硫酸铵1.33g(5g硫酸铵/100mL溶液)，加到离心管中溶解；再加0.47倍体积（12.45mL）冰冷丙酮，混匀，4℃（冰箱中）静置30min以上。4℃，10000rpm，离心10min。
6）上清液36.5mL中加入1.07倍体积（39.06mL）冰冷丙酮，4℃静置30min以上。4℃，10000rpm，离心10min。
7）取沉淀溶于2mL平衡缓冲液至全部溶解。置冰箱保存待用。
2、底物处理
底物（对硝基苯磷酸二钠已溶于平衡缓冲液中）37℃水浴5min（注意：根据分光光度计使用情况，要检测前加热）
3、酶活检测
1）将酶稀释10倍（配制取10μL，溶于90μL平衡缓冲液中得到）
2）紫外分光光度计检测条件：405nm波长，测定时间60s，取值2s，记录范围0.0-1.5。
3）取2个2mL比色皿（0.5cm光程），加入1.5mL上述（2）加热的底物缓冲液，校对归零。
4）将稀释10倍的酶液10μL加到其中1个比色皿中（仪器外侧），用手堵住皿口。快速上下倒2次，放回分光光度计中，测定没动力学曲线。
1.2.2考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
1、玻璃试管中加入5mL考马斯亮蓝。
2、在1.5mL离心管中，取上一实验得到的酶液分别稀释50、100、200倍。
3、各取100μL加入到5mL考马斯亮蓝试管中，混匀，反应5min以上，另各取100μL生理盐水分别加入到5mL考马斯亮蓝试管中。（观察蓝色，以浅蓝色为好）
4、紫外分光光度计检测条件：595nm波长
5、取2个比色皿（1cm光程）加入考马斯亮蓝（比色皿的2/3），分光光度计中校对归零。
6、将样品放入外侧比色皿中，读吸光值（得到医治蛋白浓度标准曲线范围内的度数即可，0.1-0.5之间）。
7、根据蛋白浓度标准曲线，计算酶蛋白浓度（乘以相应稀释倍数即得原始酶液蛋白浓度，注意单位）
1.2.3 SDS-PAGE电泳法测定蛋白质相对分子质量
1、装板：将垂直板型电泳的玻璃片洗净、晾干；放好胶条（棱朝上，平铺），用夹子夹好玻璃板，上面插上梳子（注意下面2个夹子要水平，两侧夹子离梳子底部1-0.5cm，表明分离胶加的位置），垂直放置在水平台面上
备用。
2、制备分离胶：在小烧杯中按下表配置所需浓度的分离胶。
分离胶制备（浓度10%，制备量10mL）
H2O 30%丙烯酰胺
1.5mol/LTris-HCL缓冲液pH8.8
10%过硫酸铵
TEMED 用量 4.1mL 3.4mL 2.4mL 100μL 10μL
注意：最后加入TEMED，应快速摇匀分离胶，向玻璃板间隙，沿着长玻璃板的内侧缓慢注胶，然后再用移液枪慢慢移动注入乙醇200μL，以防止氧气进入胶内。15min后，分离胶和乙醇之间出现分界线，表明分离胶凝固，倒出乙醇。
3、制备凝缩胶：在小烧杯中按下表配置所需浓度的浓缩胶。
浓缩胶制备（浓度5%，制备量6mL）
H2O 30%丙烯酰胺
0.5mol/LTris-HCL缓冲液pH6.8
10%过硫酸铵
进入气泡，放置约20min，待浓缩胶凝固。
4、蛋白质样品处理（小离心管装B）：在1.5mL离心管中按1:1体积比例，加样品和上样缓冲液（200μL:200μL）。100℃加热3min使蛋白变性。
5、浓缩胶完全聚合后，去掉夹子和胶条，拔去梳子（注意不要产生气魄，即电泳泳道），将凝胶玻璃板固定于电泳装置内槽上，加入电泳缓冲液（内、外槽，查漏），缓冲液高过玻璃板凹面。
6、用移液枪依次在泳道加样(5个20μL，4个40μL)。（本组将marker置于第六泳道）
7、电泳：连接正、负极，打开电源（稳压130V或电流50-60mA），开始时，电流控制在40A，样品进入分离胶后，缓慢升高电压至140V或电流50-60mA保持电压或电流强度不变。带溴酚兰指示剂迁移至下沿处，停止电泳，需1.5h左右。
8、剥胶染色：电泳结束后，取出凝胶玻璃板，用水冲洗，用金属片从玻璃两侧轻轻撬开。使板内进入空气，同时用水冲洗，取出凝胶板，将剥离下来的凝胶用水漂洗，转入染色缸中。加染色液，至摇床染色15min。
9、脱色：染色完毕，回收染色液，用水漂洗，加入脱色液，置摇床脱色，30min换1次脱色液，脱色至背景清晰。
10、观察测定蛋白的迁移率及条带，对照标准样品，分析蛋白样品的分子量及纯度。
11、拍照电泳结果，用于完成实验报告。
用量 3.4mL 1.0mL 1.5mL 60μL 8μL 注意：一旦加入TEMED，应快速摇匀浓缩胶，在已凝固的分离胶层上加浓缩胶，立即将梳子插入胶液顶部，避免
2 结果与讨论
2.1 小牛肠碱性磷酸酶的酶活测定
碱性磷酸酶酶活定义：在37℃条件下，以每分钟催化水解1μmol底物的酶量为一个酶活力单位。
碱性磷酸酶作用于缓冲液中的对硝基苯磷酸二钠，使之水稀释放出对硝基苯酚，后者在405nm光波长下有最大吸收，通过测定吸光值的变化率，可测知酚的生成量，从而计算出酶的活性单位。
酶活力的计算：
比活力（U/mg）= ΔA/min×VR×DE405×VE×C×L
1、由实验小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活测定中实验步骤可知，
反应液的体积VR= 1.5mL
稀释倍数 D= 10
405nm波长下对硝基苯酚的摩尔消光系数E405= 18.3L/(mol×cm)
所加酶液体积VE= 0.01mL
比色皿光程 L= 0.5cm
2、405nm波长下的吸光值的变化率通过分光光度计测量得到酶动力学曲线（图1）可以得到，ΔA/min=0.6179 (根据图片，自己估算斜率，注意单位。)
/看后删除
说明： 图片均要用自己的。
半栏图片宽为8.15厘米，高为4.4~5.5厘米之间，对于特别大的图可加大宽度。通栏图片宽度为16.3厘米，高为4.4~5.5厘米之间，图说为字号为小5号黑体字。
表注用小5号字，表字用6号字。
图1.酶动力学曲线
3、蛋白质原始浓度C可由实验考马斯亮蓝法测定蛋白质含量获得
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于燃料结合法的一种。在一定蛋白浓度范围内（0.01-1.0mg/mL）,蛋白质-色素结合物在
波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测量。
通过实验，利用紫外分光光堆积测定稀释50倍的酶液读得吸光值为0.1478A，利用考马斯亮蓝常量法测蛋白质标准曲线（图2）及其标准曲线拟合解析式y=0.697x-0.007得稀释后的标准蛋白浓度为0.2221mg/mL。
故蛋白质原始浓度C=50×0.2221mg/mL=11.105mg/mL
篇一：纸层析法分离氨基酸实验报告
前言
纸层析法 纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。它是一种以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。
纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。纸层析法是用滤
纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。
在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。在
做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。
纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法 能清楚地将叶绿体中的色素分离。
氨基酸 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。随着生物工程技术产业的发展逐渐成为2l世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。目前全世界氨基酸每年的产量为100万吨，而需求总量是800万吨。我国自20世纪60年代起，氨基酸的应用在食品工业占61％，在饮料工业占30％，医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。
氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用：
(1)在食品行业的应用
(2)在医药工业的应用
(3)在饲料添加剂行业的应用
(4)在化妆品行业的应用
(5)在农业上的应用
(6)在其他行业的应用
氨基酸工业还有着广阔的发展前景：
(1)传统的氨基酸生产方法
(2)运用基因工程手段生产氨基酸
(3)大力发展药用中间体,具体为：
①氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体
②非天然氨基酸是合成活性药物的重要原料
③生产高附加值的非天然氨基酸
一、实验目的
(1)掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技术（包括点样、平衡、展层、显色）。
(2)学习未知样品的氨基酸成分（水解、层析及鉴定）分析的方法。
二、实验原理
(1)纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流过固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。
(2)溶质在滤纸上的移动速度用比移值Rf值表示。
(3)Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。
(4)在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的.质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。材料与方法
三、实验装置与试剂
(1)氨基酸标准液(1mg/ml)
亮氨酸、甘氨酸和脯氨酸标准液。
(2)80%甲醇
(3)0.1%茚三酮丙酮溶液
(4)氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)
(5)正丁醇
实验仪器
(1)新华滤纸×1
(2)培养皿×1
(3)电热鼓风干燥箱×1
(4)吹风机×1
(5)毛细管×4
（6）针、线、尺×1
（7）钟罩(高约430mm,直径约290mm，具磨口塞)×1
实验操作
(1)滤纸
选用国产新华 1号滤纸， 6cm×7cm。在距滤纸2cm处划线，用
铅笔在线上标上四个点作为点样位子（留出缝线空间）。
（2）点样
点样要合适，样品点的太浓，斑点易扩散或拉长，以致分离不清。用毛细管吸取氨基酸样品，与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处的中心，这时样品就自动流出。点样的扩散直径控制在0.5cm之内，点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴，为使样品加速干燥，可用吹风机吹干，但要注意温度不可过高，以免氨基酸破坏，影响定量结果。 将点好样品的滤纸两侧比齐，用线缝好，揉成筒状。注意缝线处纸的两边不要接触。避免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动特别快而造成溶剂前沿不齐，影响Rf值。
(3)展层
将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内 (注意滤纸不要碰皿壁)，当溶剂展层至距离纸的上沿约1cm时，取出滤纸，立即用铅笔标出溶剂前沿位置。
酸溶剂系统：
正丁醇： 80%甲酸：水=15:3:2(体积比)，茚三酮2ml。温度25℃，时间1h。
注意：使用的溶剂系统需新鲜配制，并要摇匀。
（4）显色
待展层基本结束后, 置65℃鼓风箱中10-20min，鼓风保温，滤纸上即显出紫红色/黄色斑点。
（5）Rf值的计算
篇二：氨基酸的薄层层析实验报告
实验六 纸层析法观察转氨基作用
【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用
09救援一班 第三大组 李岚宇 2009222336
室温：28°
（一）实验目的：
1、学习氨基酸纸层析的基本原理。
2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。
（二）实验原理：
转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：
α—酮戊二酸 + 丙氨酸谷氨酸 + 丙酮酸
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示： ALT
物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。
（三）实验材料与仪器：
试剂：
1、0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液。
2、0.2mol/L Na2HPO4溶液81ml与0.2mol/L NaH2PO4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。
3、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔 细调至pH7.4后, 加磷酸盐缓冲液至100ml。
4 、0.1mol/Lα－酮戊二酸称取α－酮戊二酸1.461克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中，以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后，加磷酸盐缓冲液至100ml。
5、0.1mol/L 谷氨酸溶液称取谷氨酸0.735克,先溶于少量0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液中，以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后, 加磷酸盐缓冲液至50 ml。
6、0.5%茚三酮溶液称取茚三酮0.5克于100 ml丙酮中溶解。
7、层析溶剂：将重蒸过的酚2份和水1份按比例混合后，放入分液漏斗中，震荡，静置24小时后分层，将下部酚层转移到瓶中备用。
仪器：玻璃匀浆器、10ml试管、培养皿、表面皿、沸水浴锅、37℃恒温水浴箱、9cm圆滤纸、烘箱、手术剪刀、分液漏斗。
（四）实验步骤:
1、肝匀浆制备：取新鲜动物肝0.5克,剪碎后放入匀浆器,加入冷0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液1.0 ml,迅速研成匀浆， 用上述缓冲液4.5ml混匀备用。
2、 酶促反应过程
（1）取离心管两支，编号：1（测定管）、2（对照管），各加肝匀浆0. 5ml。把对照管放沸水浴中加热10分钟，取出冷却。
（2）各加0.1mol/L丙氨酸0.5 ml, 0.1mol/Lα-酮戊二酸0.5 ml,0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液1.5 ml,摇匀。
（3）37℃保温，30分钟后取出，保温完毕。
（4）把测定管放沸水浴中煮10分钟，取出后冷却，过滤。
3、层析
（1）取圆形滤纸一张（直径9cm）放洁白纸上，以圆点为中心，约1 cm为半径,用铅笔划一圆线作为基线,在线上四等份处标清四点编号作为点样原点。
（2）点样：用四根毛细玻璃管分别进行点样。把丙氨酸液、谷氨酸液分别点在原点2、4处。把测定液、对照液分别点在原点1、3处。注意斑点不宜过大（应在直径0.5cm以下）。在第一次点样点干后，再在原处同样点第2次。
（3）层析：先在滤纸圆心处打一小孔（铅笔芯粗细），再取滤纸一条卷成捻如灯芯状,上端插入滤纸中心孔中，下端剪成须状。
（4）把滤纸平放在上述培养皿上，使纸芯下浸入层析液中，盖上培养皿盖。可见层析液沿纸芯上升到滤纸中心，渐向四周扩散。当层析液前缘到离滤纸边缘约1cm时，约25分钟，取出滤纸，用镊子小心取下纸芯，放入烘箱中烘干。
（5）显色：将上述滤纸平放在培养皿上，滴0.5％茚三酮的丙酮溶液，使滤纸全部湿润，再放入烘箱干燥，此时可见紫色斑出现，比较色斑的位置，及色泽深浅，计算Rf值，分析是否发生了转氨基反应。
（五）实验结果记录：
（六）实验讨论：
1、从表格（1）中可以看出，测定管上清液点样出现了两个色斑，根据Rf值的计算也可以看出，测定管中氨基酸发生了转氨基作用，生成的未知物质b为谷氨酸，则未知溶质a为丙氨酸；对照管中因为酶的失活而没有发生转氨基反应，只有丙氨酸，所以色斑只有一个。
2、层析点样时手要洗净，操作中尽可能少量接触滤纸，以免污染。
3、层析液中含有腐蚀性酚，取用时注意安全，防止溅到皮肤及眼睛。
4、点样点不宜过大，直径小于0.5cm.
2010年9月19日
【摘 要】
随着我国医学教育改革的不断深入，医学教育的目标已发展为培养高素质、强能力、具有创新精神的综合型人才。医学实验教学是培养医学人才的重要环节，根据我院的实际情况，生化实验的实验项目按照“基础性实验”“综合性实验”“设计创新性实验”三大板块进行开设，联系后续课程内容及临床。然而我院本科医学生的生化实验，有一部分实验受到了学时不足、开设难度大的限制，为了解决这一难题，我们生化实验室运用了“倒叙法”合理缩短了学时，科学地开设实验。下面我将就我们实验室开设的几个采用“倒叙法”的实验进行阐述。
【关键词】
生化实验 倒叙法 科学
为了适应高等医学院校基础医学实验教学的发展要求，培养医学生的实践能力和创新能力，我院针对全院本科医学生的生物化学教学内容进行了合理地调整，增加了有利于学习掌握生物化学新技术、培养学生科研能力的较大型综合创新性实验。原则上我院要求本科生生物化学实验在四学时内完成，然而聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳、醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质和蔗糖酶与淀粉酶的专一性这几个实验，四个学时是远远不够的。在教学要求与教学条件的矛盾冲突下，我们实验室就采用“倒叙法”来顺利完成这些实验。
聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳实验按照正常的操作顺序应该是：1.制备分离胶;2.制备浓缩胶;3.准备电泳槽;4.上样;5.电泳;6.剥胶;7.固定、染色、漂洗;8.观察结果。而我们实验室则采用“倒叙法”，第一轮实验所需要的凝胶包括分离胶和浓缩胶都由实验室的老师准备就绪，往后每一轮实验所需的凝胶由上一轮实验的同学制备，将这个实验分段同时进行。具体操作则变为：1.准备电泳槽;2.上样;3.电泳（电泳所需要的时间大概为一个小时左右，在这一个小时跑电泳的时间里，我们可以完成后续的实验内容）;4.制备分离胶;5.浓缩胶制备;6.剥胶;7.固定与染色、脱色;8.观察结果。要合理地运用时间来完成这个实验。
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质的实验中，我们也是先电泳以后再具体讲原理和操作步骤以及方法。按照正常的程序应该是先讲实验目的、实验原理、实验器材与试剂，然后再重点讲解实验步骤，讲完以后同学们再开始操作。然而我们先简单地介绍一下实验操作，然后开始点样，点完样以后再上样和进行电泳。电泳跑上了以后我们再继续接着讲实验目的、实验原理、实验器材与试剂，再详细介绍实验步骤，及每一个步骤需要注意的'注意事项。薄膜准备：一般要浸泡半个小时以上，每一次都由实验室的老师先准备好;仪器准备：剪裁尺寸合适的“滤纸桥”是用来联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的中间 “桥梁”（也由实验室的老师准备好）;点样;电泳：调节电压，预电泳（50V，5min），然后再调节至120V左右，通电45分钟，待电泳区带展开至薄膜三分之二处时，停止通电;染色：用镊子小心将薄膜取出，浸于氨基黑10B染色液中染色1-3分钟;漂洗：漂洗3次干净的薄膜用滤纸吸干，可见5条界限清晰的区带;定量分析：剪下薄膜各蛋白色带分别放入NaOH溶液中，30分钟后去测其吸光度值;计算：计算各蛋白的相对百分含量和A/G比值。这样就有效地缩短了学时，圆满地完成了实验。
蔗糖酶与淀粉酶的专一性实验中，实验的操作步骤：1.酵母蔗糖酶提出液制备：取鲜酵母（面包酵母）1小勺，放在小试管内，倒入甲苯1～2ml，用粗玻璃棒搅拌约30～45分钟使酵母液化，然后加蒸馏水3～5ml，充分混匀。3000转/分离心10分钟，倾弃上清液，保留沉淀于小试管中，加蒸馏水1.5ml，甲苯0.2ml，混匀，在30℃水浴中过夜。次日取出，用玻璃棒搅匀，一边搅拌一边加3～5%稀醋酸，调节pH至3.5～4.0（用pH试纸测试），离心（3000转/分）10分钟。将上清液倾入洁净的烧杯内，加入少量硅藻土（约一小匙），混匀，3000转/分离心5分钟。上清液用氨水中和至pH 5左右，放4℃冰箱保存备用。使用前可根据实验需要的活性大小适当稀释。2.准备稀释唾液（淀粉酶的来源）：实验者先用水漱口，然后含一口蒸馏水于口中轻漱一、二分钟，吐入小烧杯中。3.取6支试管按表格依次加入试剂，每管混匀后置于37℃恒温水浴中保温30min。另取大试管6支，每支试管中加Benedict试剂1ml（约20滴），加热煮沸后，分别将保温后的试管中的液体加入之，继续煮沸2分钟，放试管架上冷却，观察并记录结果。解释实验结果。操作步骤中要求在30℃水浴中过夜，所以过夜这一部分的内容由实验室的老师提前给同学们准备好。同学们从次日取出开始操作，做完以后在保温的30min时间里再做过夜的这一部分，做完又可以给下一个班的同学使用。这样轮回倒转法使我们的实验有序完成。
这些实验运用“倒叙法”在我院已通过多年的实践，在圆满完成本实验的全面教学的同时，让原来的四个学时完成不了的成为可能，既满足了人才培养的教学需要，又克服了学时不足的现实条件，为实现创新人才培养目标、促进实验教学改革奠定了基础。
【参考文献】
[1]黄春霞，龙昱.生物化学与分子生物学实验教程[M].北京：北京大学医学出版社，2014.
[2]欧阳文英，唐玮蔚.临床专业认证中生物化学实验的改革与实施[J].考试周刊，2014（96）.
[3]胡桔红，欧阳文英，汤婷，等.如何科学的开设聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳[J].青春岁月，2012（23）.
