细菌内毒素干扰试验具体做法
细菌内毒素干扰试验 按表1制备溶液A、B、C和D，使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（MVD）的溶液，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。
只有当溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液C的结果在鲎试剂灵敏度复核范围内时，试验方为有效。
按下式计算C和B的反应终点浓度的几何平均值（Es和Et）。
Es= 1g-1(∑Xs\\\/4) Et= 1g-1(∑Xt\\\/4) 式中Xs、Xt分别为系列溶液C和溶液B的反应终点浓度的对数值（1g）。
当Es在0.5λ-2λ(包括0.5λ和2λ)及Et在0.5Es-2Es (包括0.5 Es和2 Es)时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。
若供试品溶液在小于MVD的稀释倍数下对试验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。
表1 凝胶法干扰试验溶液的制备 编号内毒素浓度\\\/配制内毒素的溶液稀释用液稀释倍数所含内毒素的浓度平行管数A无\\\/供试品溶液---2B2λ\\\/供试品溶液供试品溶液1 2 4 82λ 1λ 0.5λ 0.25λ4 4 4 4C2λ\\\/检查用水检查用水1 2 4 82λ 1λ 0.5λ 0.25λ4 4 4 4D无\\\/检查用水---2注：A 供试品溶液；B干扰试验系列；C鲎试剂标示灵敏度的对照系列；D阴性对照。
可通过对供试品进行更大倍数的稀释或通过其他适宜的方法（如过滤、中和、透析或加热处理等）排除干扰。
为确保所选择的处理方法能有效的排除干扰且不会使内毒素失去活性，要使用预先添加了标准内毒素再经过处理的供试品溶液进行干扰试验。
当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试验。
当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。
细菌内毒素检测步骤，详细的
检测方法: 1、每套器具中,注入80mL水,放置37度保温至少1小时. 这就是A溶液了。
2、这种情况下，内毒素要求(限值)就是 0.25EU\\\/mL. 3、买灵敏度是0.25EU\\\/mL的鲎试剂。
4、内毒素制备0.5EU\\\/mL浓度，作为阳性对照，药典中的C溶液。
5、制备B溶液，这个可能要用近似法来制备，取5EU\\\/mL的内毒素溶液 0.2mL与1.8mL的A溶液混合，漩涡混合至少30秒，就成近似的B溶液了。
6、加样反应，取 8 支鲎试剂，全部加0.1mL的细菌内毒素检查用水复溶。
然后分别加A、B、C溶液，0.1mL， 还有加细菌内毒素检查用水，0.1mL， 每种溶液平行两管。
7、放到37度水浴或干式的恒温仪中反应60分钟，就可以看结果了。
8、B、C溶液的反应管必须要阳性，就是轻轻倒转180度过来，鲎试剂安瓿里的反应溶液形成了凝胶体，不滑落。
而D溶液，就是细菌内毒素检查用水那2管，必须要阴性，这样3个满足了，就说明你的试验成功了。
最后看A溶液的反应情况，阳性就说明原套器具每套大于20EU。
否则就合格，小于20EU了。
当然，1管阳性，1管阴性就要重新复查了，方法看药典。
细菌内毒素中什么是定量法
目前,国内外广泛应用且检测技术比较成熟的细菌内毒素定量检查法主要有以下四种。
1. 1 凝胶法 是目前最常用的细菌内毒素检查法。
即在10mm×75mm的小试管内,加入待检样品和鲎试剂各0. 1ml混合, 37℃、60 min保温反应后, 180°倒转,根据凝胶形成的情况(凝胶是否坚实)作为判定指标的一种半定量法。
此法操作简单,经济而且不需要专用仪器。
凝胶法既可限量检测内毒素,也可在0. 03 EU•ml-1以上进行半定量测定。
1. 2 显色基质法(合成基质法、显色合成基质法, Chromoge-nic Technique) 系根据细菌内毒素与LAL(或TAL)试剂中的C系反应所激活的凝固酶,使用人工合成的鲎三肽(即与PNA相连的显色基质如BOC-LEU-GLY-ARG-PNA等)作为显色基质,水解鲎三肽中的精氨酸肽链,通过测量反应液中释放出游离的对硝基苯胺(PNA)的吸光值而进行定量的一种检测方法。
该法需要专用仪器。
目前主要用于微量血浆、血清、全血、骨髓液及尿、乳汁等的临床检验以及家禽、实验动物、人工脏器的安全性评估等方面。
根据测定原理的不同分为终点显色法和动态显色法。
1.2.1 终点显色法(EndopointColorimetric Assay) 系根据在一定时间内游离出的PNA的量与细菌内毒素浓度成正比例关系进行测定的一种分析方法。
PNA(黄色)的吸光度值可使用单波长405 nm或双波长(测定波长405 nm、参照波长492 nm)测量,或利用游离的PNA与红色偶氮试剂发生反应所形成的红色偶氮蓝复合物在545nm单波长或双波长(测定波长545 nm、参照波长630 nm)进行检测。
一般可在0. 006~15 EU\\\/ml范围内进行定量。
1.2.2 动态显色法(Kinetic Colorimetric Assay) 系根据游离的PNA的吸光度变化率(mAbs\\\/min)与细菌内毒素浓度成正比例关系(比色反应速度法Pate Assay)或到达事先设定的反应吸光度变化值所需要的时间Ta的对数值与细菌内毒素浓度的对数值成反比例关系(比色反应时间法OD-Time As-say)进行测定的一种分析方法。
一般可在0. 006~50 EU\\\/ml范围内进行定量。
1. 3 酶联免疫测定法(ELISA法) 基于抗原抗体的酶联免疫测定法,目前在国外应用十分普遍。
主要由外加热原质刺激巨嗜细胞后产生的内热原物质(如TNF, TL-1等),而进行的定量测定方法。
体外人全血热原检测方法是近年来国内外正在兴起的一种研究热原检测的新方法,具有检测范围广,灵敏度高,不同个体血液的结果差异小等优点[2, 3]。
国内一些学者,已采用酶联免疫测定法对体外人全血热原检测方法的可行性进行研究和优化,取得了可喜的进展[4]。
1. 4 浊度法(Turbidim etrc Technique) 系微量的内毒素与TAL(LAL)试剂中的C因子发生反应,由内毒素引发激活的凝固酶,切断凝固蛋白特定位置的精氨酸肽键,形成凝固蛋白从而产生凝胶过程中的浊度变化,采用适当的光学仪器测量的一种分析方法。
此法操作比较简单、经济、灵敏度高,检测范围广。
通常在0. 006~300 EU\\\/ml的范围内进行定量,但需要专用仪器。
根据测定原理的不同又可分为终点浊度法和动态浊度法。
1.4.1 终点浊度法(EndopintTurbidimetric Technique) 即根据到达规定点上反应液的最终浊度值(吸光度或透过光亮值)与细菌内毒素浓度成正比例或反比例的关系而进行测量的一种检测方法。
由于未形成标准化,目前国内外都很少使用,也未见有专门仪器使用。
1.4.2 动态浊度法(Kinetic Turbidimetric Technique) 即根据测定到达事先设定反应液的浊度变化(吸光度变化)值所需要的时间(Ta比浊反应法)或浊度变化(透过光量比)值所需要的时间(Tg:比浊时间分析法)的对数值与细菌内毒素浓度的对数值成反比例关系或浊度的(吸光度值)每分钟变化(吸光度变化mAbs\\\/min)与细菌内毒素浓度成正比例关系(比浊反应速度法)而进行测量的一种分析方法。
通常,浊度法一般是指动态浊度法,而且在日、美、欧等国有专用仪器,并通过美国FDA认可,其中作为动态比浊仪一般要求为:恒温槽(37±1℃)、光源、检测器及内置数据分析等。
其中检测波长从80~660 nm,主要根据仪器的不同而各异,检测时间为60~90 min之间。
由于国内对细菌内毒素定量检查法的研究起步较晚,专门用于定量的高灵敏度TAL(最低检测限是0. 006EU\\\/ml)还未研制开发出来,还受细菌内毒素检查用水(内毒素的含量小于0. 005 EU\\\/ml)、内毒素标准品质量不高等因素的制约,对仪器定量法研究较多且检测技术较为成熟的就是动态浊度法。
本法收载于2000年版《中国药典》二部附录中,在2005年版《中国药典》二部附录中,将浊度法和显色基质法修订为光度测定法,作为测定内毒素含量的方法。
细菌内毒素的检测
这名朋友你好
你的问题没讲明白，“检查用水”是作为样品，还是作为“细菌内毒素检测时的稀释剂”使用。
如果“检查用水”作为样品，则《中国药典》规定 其限值为：0.25EU\\\/ml，而不是你说得10EU\\\/ml； 如果你作为“细菌内毒素检测时的稀释剂”使用，这是不符合规定的，〈中国药典〉“细菌内毒素检测法”明确规定 稀释剂为“细菌内毒素检查 用水”其内毒素含量小于0.015EU\\\/ml（用于凝胶法）。
以下是我前两天回答一位网友时的答复，我觉得问题内容差不多，你可以细细看看，会有帮助，如有不懂之处，可以问再我，不过我今天有事要到外地去，明天才能答复你。
《中国药典》规定注射用水细菌内毒素限值为：0.25EU\\\/ml因注射用水无干扰成分存在，可以不用稀释直接检测，最简便的方法是采用灵敏度0.25EU\\\/ml的鲎试剂（TAL））直接检查。
即 取8支灵敏度为0.25EU\\\/ml的TAL，每支加0.1ml细菌内毒素检查用水（BET水）复溶，再分别制样品管2支（直接加入1ml注射用水）；阴性对照管2支；阳性对照管2支；PPC管2支，按药典规定操作。
加果采用 灵敏度0.125EU\\\/ml的鲎试剂 ，就要用BET水稀释一倍后再进行实验。
对药品进行细菌内毒素检验的意义是什么
细菌内为外源性致热原，它可激活粒细胞等，使之释放种内源性热原质，作用温调节中枢引起发热。
主要具有以下生物活性：1、致热性。
2、致死性毒性。
3、白细胞减少。
4、Shwartzman反应。
5、降低血压，休克6、激活凝血系统。
7、诱导对内毒素的耐受性。
8、鲎细胞溶解物（鲎试剂）的凝集。
9、刺激淋巴细胞有丝分裂。
10、诱导抗感染的特异性抵抗力。
11、肿瘤细胞坏死作用。
内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。
内毒素小量入血后被肝脏枯否细胞灭活，不造成机体损害。
内毒素大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”。
因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类（如一次性注射器，植入性生物材料）必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。
鲎试验被称作为“细菌内毒素试验”，逐渐替代家兔热原试验，但由于部分药品由于自身特殊性无法通过稀释法消除干扰，因此鲎试验还无法完全取代家兔热原试验。
细菌内毒素检查法主要有凝胶法和光度测定法两种方法。
前者利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素，后者包括浊度法和显色基质（比色）法，系分别利用鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少来定量测定内毒素。
氯化钠注射液的细菌内毒素的标准是多少
氯化钠注射液细菌内毒素标准是依(2005版)二部细菌内毒素检查方法进行检验的。
标准应该是个每1ml应小于0.5EU.
