植物组织培养的学习心得和设计一个实验..
组织培养技术是20世纪末植物学中起来的一种新技术。
它在植物细胞全能性学说的推动下，得到迅猛发展。
近20多年来，我国植物组织培养在全国各地广泛开展。
它是指在无菌的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其增殖分化、生长、发育而形成完整的再生植株，即植物克隆。
植物组织培养一般分为以下几种： 1、胚胎培养 指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。
2、器官培养 指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖、茎节和切段，叶的叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶，花器的花瓣、雄蕊（花药、花丝）、胚珠、子房、果实等的离体无菌培养。
3、组织培养 指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。
这是狭义的植物组织培养。
4、细胞培养 指以单个游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。
5、原生质体培养。
指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。
植物组织培养的特点 1、培养条件可以人为控制 组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。
2、生长周期短，繁殖率高 植物组织培养是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。
另外，植株也比较小，往往20-30天为一个周期。
所以，虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。
3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制 植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。
它是未来农业工厂化育苗的发展方向。
它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。
植物组织培养的优点： 1不受生长季节的限制 2不携带病毒 3培养周期短 4可用组培中的愈伤组织支取特殊的生化制品 5可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植物 6可诱导之分化成需要的器官，如根和芽 7解决有些植物产种子少或无的难题， 8不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征 9投资少，经济效益高 10繁殖方式多，试用品种多开设植物组织培养课，可以使我们更多地了解生物技术发展的新动态、新技术、新方法。
在学习和掌握组培基本理论、基本技能的同时，提高观察能力、动手能力、独立思考的能力，学会发现问题、分析问题、解决问题；并通过学习这一生物技术，培养学习和关注生物科学的兴趣。
菊花是一种最为常见的并被人们所喜爱的花卉,与梅兰竹一起被称为岁寒四君子.它的栽培在我们由来已久,关于菊花的赞美之辞非常之多。
普通的栽培方法是用扦插等无性繁殖的手段，方法比较简单且成活率也高具体见
19岁女孩边上学边照顾植物人妈妈 写读后感600字
不知19岁女孩底慧敏照顾植物人妈妈，满头白发的事件感动了多少人，尤其对于家中有植物人患者的家庭来说，小女孩的坚强更坚定了他们对治疗家中植物人的信心。
其实每个植物人家庭都有自己的辛酸苦楚，长期沉重的压力让他们不堪重负，一度想要放弃，但人心毕竟是肉长的，说放弃哪有那么简单。
宁愿自己受苦受累，也咬牙坚持着，等待植物人苏醒的那一天。
京东中美医院生物治疗中心的表示，要相信目前的医学水平，很多有效的疗法已经开发研制出来，并应用于临床，取得了不错的效果。
但需要注意的是，有些医院打着新技术、新疗法的旗帜，却根本拿着骗人的把戏治疗植物人。
不仅一点效果没有，还耽误了大量的时间和金钱，甚至会危害患者生命。
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多能免疫细胞疗法的核心，在于将人体内具有特定生物活性的多能免疫细胞群，经必要的提取、纯化及培养流程后，将其输入到病灶部位，通过细胞因子的自分泌和旁分泌等途径，最大限度激发人体自我修复能力，恢复受损的组织、器官功能，达到治疗疾病的目的。
此项技术在治疗多种细胞损伤性疾病，如小儿脑瘫、自闭症、植物人、糖尿病、脑萎缩等领域均获得了良好的临床效果。
生命读后感
读书笔记10篇50字左右【篇一：50字读书笔记大全】《宝葫芦的秘密》读书笔记50字《宝葫芦的秘密》这本书很好看。
这本书的故事以我从小就梦想拥有万能的宝葫芦，到后来如愿以偿拥有宝葫芦，想怎样就怎样，无所不能，从开始时的新奇刺激到后来烦恼无穷无尽。
故事在最后，笔锋一转，原来拥有万能的宝葫芦只不过是一个梦而已。
虽然全书叙述的只是一个梦，却非常有趣，生动活泼。
同时也告诉了我们：天上不可能掉馅饼，真正的幸福是要靠自己的劳动和聪明才智的。
可爱的鼠小弟读书笔记50字可爱的鼠小弟这本书很好看，里面的小老鼠很诚实杯子打破了主动向妈妈承认错误，也很聪明。
我们应该像他一样要做个诚实的孩子。
小鹿学长跑读书笔记50字今天我读了《小鹿学长跑》。
清早，太阳公公还没露出笑脸，小鹿就开始练习跑步了。
很多小动物都还在睡懒觉，可是，小鹿已经呼吸着树木里的清新空气，越跑越快了。
小鹿每天坚持练习长跑，身体锻炼得非常强健，所以，小鹿一次次逃脱了凶猛老虎的追捕。
这个故事告诉我们：做任何事情都不能偷懒，只有坚持，才能学到真本领。
窗边的小豆豆读书笔记50字《窗边的小豆豆》的主人公是一个无忧无虑，身心健康的小女孩。
尽管她因为淘气，一年级就被退学了，但她还是那样的开朗。
小豆豆这个女孩吸引住了我们，让我们跟小豆豆一起快乐，烦恼，难过小豆豆的一言一行全部在一行行文字之间流露出来，让你不知不觉得爱上了这本书，爱上了一个叫小豆豆的女孩。
窗边的
张衡的读后感怎么写
2010—2011学年上学期一年级班级工作计划转眼间，新的一学期又来临了。
多年来，深知班主任在学校中的地位是多么重要。
班主任不仅是一个班学生品德、学习、健康和生活等方面的教育者、组织者和指导者，也是班级教育活动的主要实施者和个方面教育力量的协调者。
因而在体会着班主任的那份压力与艰辛中我一直积极思考如何做好班主任工作，望自己能成为一名优秀的班主任。
一 .指导思想：执行党的教育方针，促进学生德、智、体、美、劳的全面发展，教育中必须讲究艺术，促进学生德、智、体、美、劳的全面发展。
另外把德育放在首要地位，引导学生热爱共产党、热爱社会主义、热爱祖国、热爱劳动，逐步树立科学的人生观、世界观。
二、学生现状分析： 本班共有28名学生，10名女生，18名男生。
每个孩子都活泼可爱，有着很强的上进心和。
他们纯洁善良，好奇心强，求知欲强。
但是由于年龄小，自制能力差，时常不能控制自己，上课时爱随便说话或者做小动作。
很多行为习惯有待进一步培养。
三、工作目标第一：建立完善的管理制度。
班级里实行班干部责任制。
挑选和培养积极分子，形成班级核心；形成正确的集体舆论；形成集体纪律；做好个别教育工作。
第二：狠抓学生的学习，促使良好学习氛围的形成。
提高学生学习的主动性。
为了让学生在学习上充分地展开竞争，提高自我学习的能动性，要多开展相应竞赛活动激发每个学生的学习积极性。
第三：重视和各种活动的开展，培养学生团结协作的精神。
用活动来达到教育的目的，增强，要开展好。
第四：保持良好的卫生习惯。
班级卫生实行责任到位制，每天小结进行奖惩。
实行监督。
四、具体措施： 1.重视：养成良好的和生活习惯，对学生的成长进步是十分必要的，良好的行为习惯使一个人的终生发展受益非浅。
因此，在班级进行良好品德的是十分必要的。
根据学生的思想实际情况，与学校的德育工作密切配合，本学期，将从不同的方面和角度对学生进行规律性的常规训练。
重点落实好，使学生逐步形成良好的道德品质，行为习惯，和积极的，不使一个学生掉队。
2、加强后进生管理：面向全体学生，分类施教，加强对后进生的辅导，要从关心、爱护学生的角度出发，了解关心学生。
及时了解学生的心理变化，掌握他们成长道路上的发展情况。
3、及时了解学情：准确把握学生对知识的掌握，因材施教，在重点难点上下工夫，以促进全班成绩的平稳、扎实地上升。
4、家教结合：经常保持与否学生家长联系，使学校教育和家庭教育有机地结合起来，本学期，力争把所有的家长走访一次，甚至多次。
要不厌其烦的做好后进生的转化工作，抓两头，促中间，使全班形成一盘棋，真正成为一个团结向上的班集体。
5、培养班级干部：及时召开班干部会议，针对他们在工作中出现的问题，教给他们工作方法，使他们明确自己的职责，指出他们的优缺点和今后努力工作的方向。
同时，还要求他们注意班干部成员之间的合作，齐心协力，拧成一股绳，尽力在同学之间树立他们的威信，创造机会，锻炼和培养他们的能力。
6、重视关怀教育：要关心学生的生活，及时和家长联系，体贴他们的冷暖，了解他们的心理，建立平等和谐的师生关系，做学生的知心朋友，以使班主任工作做的更好。
7、抓好少先队工作：班级工作的一个重要部分，就是班主任工作，是充分发挥学生特长、张扬学生个性的有效途径。
本学期将积极配合学校少先大队，结合实际搞好各项活动。
8.重视文体工作：教育学生上好所有学校开设的课程，积极参加，积极参与学校组织的文娱活动，重视各项比赛的积极参与，培养学生的参与意识。
五、班级主题活动安排： 第一周 1. 总结暑假工作，提出新学期要求，做好新学期打算。
2.学习和《学校管理条例》。
3.抓好学生常规，早日进入正常秩序。
第二周 1.组织好教师节主题班队会活动。
2.进行习惯养成教育，形成良好行为习惯。
3. 继续抓好常规教育，进行常规训练。
第三周 1. 继续巩固上两周的活动内容。
2.加强劳动观念教育，搞好个人和集体卫生。
第四周 1. 进行班级写字比赛。
2.继续抓好常规教育。
第五周 1. 庆“十一”，进行爱国主义教育。
2.组织词语接龙比赛。
第六周 1.对学生进行安全教育。
2.培养学生的参与意识和集体主义精神。
第七周 1. 继续抓好纪律和学习目的教育。
2.进行班级朗读比赛。
第八周 1. 继续抓好课堂常规教育。
2.进行尊敬父母的教育。
第九周 1. 进行计算题比赛。
2.培养学生正确的是非观念。
第十周 1.准备期中考试。
2.继续抓好法制和安全教育。
第十一周 1 向学生进行学习目的教育，抓好复习教 2.继续抓好常规教育。
3.期中考试。
第十二周1.总结期中考试，吸取经验教训。
2.教育学生树立正确的学习目的教育和审美观念。
第十三周1.向学生进行爱国主义教育。
2.准备节目，欢庆元旦。
第十四周1.进行勤俭节约教育。
2.对学生进行爱护公物教育。
第十五周1. 准备阅读比赛，写字比赛。
2.开展我爱奥运活动。
第十六周1.培养学生的集体主义观念。
2.教育学生早睡早起，不能因天冷而贪眠。
第十七周 1.再次进行学习目的的教育。
2.评选班级文明学生。
第十八周 1.继续巩固上周活动内容。
2.举行班级庆元旦演出。
第十九周1.制定复习计划，鼓励学生努力学习。
2.学习三好学生评选条件，准备评比。
第二十周1.搞好各类评比，树立榜样。
2.加强安全教育，做好放假前的准备工作。
生物—名词解释：转座子
转座(因)子是基因组中一段可移动的DNA序列，可以通过切割、重新整合等一系列过程从基因组的一个位置“跳跃”到另一个位置。
复合型的转座因子称为转座子(trans—poson，Tn)。
这种转座因子带有同转座无关的一些基因，它的两端就是IS，构成了“左臂”和“右臂”。
两个“臂”可以是正向重复，也可以是反向重复。
这些两端的重复序列可以作为Tn的一部分随同Tn转座，也可以单独作为IS而转座。
-----------------------以下仅供了解-----------------转座子是细菌细胞里发现的一种复合型转座因子，这种转座因子带有同转座无关的一些基因，如抗药性基因；它的两端就是IS，构成了“左臂”和“右臂”。
两个“臂”可以是正向重复，也可以是反向重复。
这种复合型的转座因子称为转座子(trans—poson，Tn)。
这些两端的重复序列可以作为Tn的一部分随同Tn转座，也可以单独作为IS而转座。
Tn两端的IS有的是完全相同的，有的则有差别。
当两端的IS完全相同时，每一个IS都可使转座子转座；当两端是不同的IS时，则转座子的转座取决于其中的一个IS。
Tn有抗生素的抗性基因，Tn很容易从细菌染色体转座到噬菌体基因组或是接合型的质粒。
因此，Tn可以很快地传播到其他细菌细胞，这是自然界中细菌产生抗药性的重要来源。
两个相邻的IS可以使处于它们中间的DNA移动，同时也可制造出新的转座子。
Tn10的两端是两个取向相反的IS1O，中间有抗四环素的抗性基因(TetR)，当TnlO整合在一个环状DNA分子中间时，就可以产生新的转座子。
当转座子转座插人宿主DNA时，在插入处产生正向重复序列，其过程是这样的：先是在靶DNA插入处产生交错的切口，使靶DNA产生两个突出的单链末端，然后转座子同单链连接，留下的缺口补平，最后就在转座子插入处生成了宿主DNA的正向重复。
已知的转座因子的转座途径有两种：复制转座和非复制转座。
1．复制转座(replicative transposition) 转座因子在转座期间先复制一份拷贝，而后拷贝转座到新的位置，在原先的位置上仍然保留原来的转座因子。
复制转座有转座酶(transposase)和解离酶(resolvase)的参与。
转座酶作用于原来的转座因子的末端，解离酶则作用于复制的拷贝。
TnA是复制转座的例子。
2．非复制转座(non-replicative transposition) 转座因子直接从原来位置上转座插入新的位置，并留在插入位置上，这种转座只需转座酶的作用。
非复制转座的结果是在原来的位置上丢失了转座因子，而在插入位置上增加了转座因子。
这可造成表型的变化。
保留转座(conservative transposition)也是非复制转座的一种类型。
其特点是转座因子的切离和插人类似于入噬菌体的整合作用，所用的转座酶也是属于入整合酶(integrase)家族。
出现这种转座的转座因子都比较大，而且转座的往往不只是转座因子自身，而是连同宿主的一部分DNA一起转座。
非复制转座可以是直接从供体分子的转座子两端产生双链断裂，使整个转座子释放出来，然后在受体分子上产生的交错接口处插入，这是“切割与黏接”(“cut and paste)的方式。
另一种方式是在转座子分子同受体分子之间形成一种交换结构(crossover structure)，受体分子上产生交错的单链缺口，与酶切后产生的转座子单链游离末端连接，并在插入位点上产生正向重复序列；最 后，由此生成的交换结构经产生缺口(nick)而使转座子转座在受体分子。
供体DNA分子上留下双链断裂，结果 或是供体分子被降解，或是被DNA修复系统识别而得到修复。
在复制转座过程中，转座和切离是两个独立事件。
先是由转座酶分别切割转座子的供体和受体DNA分子。
转座子的末端与受体DNA分子连接，并将转座子复制一份拷贝，由此生成的中间体即共整合体(cointegrat，)有转座子的两份拷贝。
然后在转座子的两份拷贝间发生类似同源重组的反应，在解离酶的作用下，供体分子同受体分子分开，并且各带一份转座子拷贝。
同时受体分子的靶位点序列也重复了一份拷贝。
酵母接合型的相互转换也是复制转座所产生。
酿酒酵母(Saccharomvcescerf—visiae)的生命周期中有双倍体细胞和单倍体细胞两种类型。
单倍体细胞则有a型和α型两种接合型(mating type)。
单倍体酵母是a型还是α型，由单个基因座MAT所决定。
MAT有一对等位基因MAT。
和MATα，在同宗接合(homothallic)的酵母菌株中，酵母菌十分频繁地转换其接合型，即从a转换成α，然后在下一代又转换为a。
这种转换和回复的频率已远远高于通常的自发突变，表明这不是通常的突变机制。
现在已经知道，在MAT基因座两侧有两个基因带有MATα和ATα的拷贝，这就是HMLα和HMRα基因。
这两个基因贮存了两种接合型等位基因，当转座给MAT基因座时就发生了接合型的转换。
因此，MAT基因座是通过转座而转换其接合型的。
MAT基因座的序列转换成另一个基因的序列，这种机制称为基因转换(gene convertion)。
------------------------以下仅供参考-------------------------1951年Barbara Mclintock首先在玉米中发现了控制元件，后来命名为转座元件或转座子(transposon)。
转座子是基因组中一段可移动的DNA序列，可以通过切割、重新整合等一系列过程从基因组的一个位置“跳跃”到另一个位置。
这一元件不仅可用于分析生物遗传进化上分子作用引起的一些现象，还为基因工程和分子生物学研究提供了强有力的工具，可以在不了解基因产物的生化性质和表达模式的情况下，分离克隆植物基因，即转座子标签(transposon tagging)，又称为转座子示踪法。
其原理是利用转座子的插入造成基因突变，以转座子序列为基础，从突变株的基因文库中筛选出带有此转座子的克隆，它必定含有与转座子序列相邻的突变基因的部分序列，再利用这部分序列从野生型基因文库中获得完整的基因〔1〕。
1984年，用转座子标签法首先在玉米中分离了bronze基因，该基因编码了玉米花色素合成途径的关键酶——UDP-葡萄糖类黄3-O-葡萄糖基转移酶〔2〕。
此后还利用转座子标签技术分离了许多植物基因。
1 转座子概述 转座子可以分为两大类：以DNA-DNA方式转座的转座子和反转录转座子(retrotransposon)。
第一类转座子可以通过DNA复制或直接切除两种方式获得可移片段，重新插入基因组DNA中。
根据转座的自主性，这类元件又可以分为自主转座元件和非自主转座元件，前者本身能够编码转座酶而进行转座，后者则需在自主元件存在时方可转座，以玉米的Ac\\\/Ds体系为例，Ac(Activator)属于自主元件，Ds(Dissociation)则是非自主元件，必需在Ac元件存在下才能转座〔1〕。
第二类转座子又称为返座元(retroposon)〔3〕，是近年新发现的由RNA介导转座的转座元件，在结构和复制上与反转录病毒(retrovirus)类似，只是没有病毒感染必须的env基因，它通过转录合成mRNA,再逆转录合成新的元件整合到基因组中完成转座，每转座1次拷贝数就会增加1份，因此它是目前所知高等植物中数量最大的一类可活动遗传成分。
目前共发现了3种类型反转录转座子：Tyl-copia类，Ty3-gypsy类和LINE(long interspersed nuclear Clements)类转座子，前两类是具有长末端重复的转座子，LINE类转座子没有长末端重复。
高等植物中的反转录转座子主要属于Tyl-copia类，分布十分广泛，几乎覆盖了所有高等植物种类〔4〕。
克隆转座子主要有两条途径：其一，利用抗体识别或cDNA探针从野生型植株中获得表达量降低或不稳定基因座的序列，再从突变体中分离得到相应的转座子：其二是根据序列同源性，在基因组的不同位置分离同一家族的转座子成员。
目前已经克隆的植物转座子约156种(来自Genbank的报告)，表1列出了常用于转座子标签的一些植物转座子。
表1 常用植物转座子标签的转座子名 称 来 源 类 型 Ac(Activator) 玉米 Ⅰ类自主型转座子 Ds(Dissociation) 玉米 Ⅰ类非自主型转座子 Mu(Mutator) 玉米 Ⅰ类自主型转座子 Spm\\\/En 玉米 Ⅰ类自主型转座子 Tam 金鱼草 Ⅰ类自主型转座子 dTphl 拟南芥 Ⅰ类自主型转座子 Tos17 水稻 反转录转座子 2 转座子标签的转座元件体系 1984年首次用转座子标签法克隆了玉米bronze基因之后，在其它高等植物中一直没有发现象Ac\\\/Ds、Spm\\\/En类转座活性很高的转座子，因此在很长一段时间内都是利用玉米和金鱼草中转座性质较清楚的内源自主性转座子。
B.Baker等人首先证明了玉米的Ac\\\/Ds转座元件在转基因烟草中有作用，此后又发现Ac\\\/Ds在其他许多物种中如拟南芥、蕃茄、矮牵牛、亚麻、马铃薯、黄豆和水稻中都有活性〔5〕。
1993年用Ac元件从矮牵牛中成功地克隆了一个花色素苷合成基因，开创了用外源转座子在异源宿主中分离克隆基因的先河〔6〕。
目前植物基因工程常用的转座元件体系分为天然和人工改造两大类，前者包括自主元件单因子体系和反转录转座元件体系，后者主要是人工改造的双元因子体系。
2.1 自主转座元件单因子体系：自主转座元件单因子体系利用了转座活性较高的自主转座子如玉米的Mu转座子、Ac转座子和矮牵牛的dTpH1转座子，已经克隆了拟南芥白化病基因(albino)、雄性育性基因、蕃茄的抗病基因Cf-9等基因〔7〕。
这一转座体系具有两大优点：一是在植物中插入拷贝数高，如Mu元件每个基因组平均拷贝数可达100以上，因此可以在大田自然培养条件下获得大量突变个体；二是只需筛选相对较少量的植株就能标记所有基因。
然而，这一体系也存在一些问题：自主转座元件高频率的转座有可能切除转座酶而留下一些序列导致永久突变；自主转座在体细胞内可能造成基因功能自动恢复；自主元件切除留下一些片段使转座元件不能与突变表型共分离，这些都增加了筛选克隆的困难，阻碍了转座子标签的推广〔8〕。
2.2 反转录转座元件体系：虽然反转录转座子作为一个整体，在整个植物基因组中拷贝数很多甚至是最多的一类成分，但它包括了许多亚群，有的亚群仅由一个或几个拷贝组成，这些以单拷贝或低拷贝方式存在的成分比较容易识别，同时实验证明反转录转座子的转座活动在组织培养中能被激活，因此它们是一类很有潜力的转座子标签体系。
1996年Hirchick等人就利用水稻反转录转座子Tos17建立了水稻基因敲除体系(gene knock-out system)，Tos17可以在组织培养过程中被激活，插入水稻基因组中，使基因失效〔3〕。
1999年Sato等利用这一体系分离了6个水稻kn1—型同源异型框基因，发现了引起水稻植株矮化的突变基因OSH15〔9〕。
最近Lucas等将烟草中的有活性的Ty1-copia类反转录转座子导入拟南芥〔8〕，发现它在后者中进行了转座，新的拷贝插入到其它基因的可读框中。
之后又相继将它导入蕃茄和水稻中，在新的宿主中进行了表达，而且宿主的内源反转录转座子不影响新导入转座子的转座，说明反转录转座子并不受植物种类差异的影响。
双子叶植物中的反转录转座子不仅可在异源双子叶植物中转座，也可以在单子叶植物中表达，这为反转录转座子用于转座子标签提供了更广阔的前景。
2.3 双元转座子体系：双元转座子体系由一个非自主转座元件和一个改造过后自身不能转座的自主转座元件组成，后者仍编码转座酶引起前者的转座，分别构建含两个元件的植物表达载体，转化植物培育了分别含有非自主性转座子和转座酶的株系，再通过转基因植株杂交，在F2代就能获得大量由转座子引起的突变体。
Shimamoto等培育了含Ds转座元件和含Ac转座元件转座酶(AcTPase)基因的两种水稻株系(图1)，通过杂交筛选得到了大量矮化、花期改变的突变体〔10〕。
图1 含有Ds元件和Ac转座酶的双元转座体系的构建A:缺失Ac元件的部分片段获得非自主性转座子Ds元件，加上35S启动子和潮霉素抗性基因。
B:构建编码转座酶的转座因子，Ac元件的转座酶片段与35S启动子相连。
为了减少筛选子代突变体的工作量，可以在构建的转座元件上插入用于筛选转化和切除的标记基因如抗生素抗性基因、除草剂抗性基因等。
Knapp等构建了带潮霉素磷酸转移酶基因的Ds元件DsHPT，并将该元件插入除草剂抗性基因(ABR)中(图2)，潮霉素抗性基因用于筛选含Ds元件的转基因植株，BAR基因用于筛选Ds从T-DNA位点切除的转基因植株〔7〕。
图2 Ds元件的改造注：BL T-DNA左边界区； BR T-DNA左边界区；Pnos胭脂碱合成酶启动子；HPT潮霉素磷酸转移酶基因；BAR抗除草剂基因；P35S烟草花叶病毒35S启动子；NPTII新霉素磷酸转移酶II。
3 标签的策略 根据利用转座子标签的目的不同，可以采取两种方式的标签策略：定向标签和随机标签。
3.1 定向标签(directed tagging)：定向标签是用一个稳定遗传的稳性纯合体与一个带有活跃转座元件的显性纯合体杂交，杂交后代可能产生3种表型：跟显性亲本表型一致，新的表型与隐性亲本表型一致，后两种子代是由于转座子插入了显性等位基因座。
这一策略可以在F1代直接“标签”感兴趣的目的基因〔11〕。
3.2 随机标签(random tagging)：随机标签是将带有功能性转位因子的显性纯合系植株与不带转位因子的同种植株杂交，产生的F1子代再自交，在F2代中就可筛选到转座子随机插入引起突变表型的突变株，这一策略的目的是为了发现、鉴定带有多种不同特征的新突变〔11〕。
4 标签基因的分离和克隆4.1 Southern-based分离法：这是转座子标签分离克隆“标签”基因的常用方法，它是通过杂交得到纯合突变株，构建该类突变株的核基因文库，以转座子片作作为探针从该基因文库中筛选中同源的转座子，因为转座子已插入目的基因中，于是就筛选得到含突变基因的片段，再将这一片段亚克隆标记作为探针，去筛选另一个正常植株的核基因文库，获得完整的正常目的基因。
为了增加转座子插入特定基因的机率，需要采用高效转座子体系，如玉米的Mu元件，但它的标签群在一个基因组内可达100个拷贝，这又给Southern-based分离法分析突变现象，鉴定特定插入序列的工作带来了相当大的工作量，只能通过多代与含低拷贝数元件的株系杂交来减少每一植株中插入序列的数量〔12〕。
4.2 PCR-based分离法4.2.1 反向PCR分离法：Souer等1995年设计了将反向PCR(Inverse polymerase chain reaction, IPCR)和差别筛选结合的方法，从矮牵牛W138中分离了高效转座子标签dTph1标记的基因(图3)〔13〕。
W138中含有200个拷贝以上的内源dTph1元件，自交后代形成大量不稳定的突变本，包括花色素合成、植物和花发育、育性或叶绿素合成等方面的突变体，用常规方法分离新基因需花大量的时间将突变株与含低拷贝数转座元件的株系多次杂交。
Souer等利用反向PCR扩增突变体和野生型的dTph侧翼序列，其中突变体的扩增产物克隆到M13mp18载体上，感染细菌，再以突变体和野生型的扩增片段为探针与噬菌斑复制滤膜杂交，筛选差示克隆，分离dTph1插入的侧翼片段作为探针，再从野生型基因文库中筛选基因。
反向PCR和差别筛选结合的方法不仅仅可以用于分离高拷贝转座子元件标签的基因，而且可以用于克隆基它植物轻微变异株中被标签基因，加速低拷贝转座元件标签基因的分离。
此外，采用嵌套的反向PCR引物可以提高有效扩增dTph1侧翼序列的产量〔13〕。
图3 特异性克隆突变植株转座元件侧翼序列4.2.2 TAIL-PCR分离法：刘耀光等设计热不对称交错PCR方法，(Thermal asymmetric interlaced PCR TAIL-PCR)最初用于YAC和Pl载体克隆基因的分离，后又用于转座子标签基因的分离，取得了成功〔14〕。
其基本原理是利用多个嵌套的转座子插入序列特异性引物和一个短的随机简并引物(Arbitrary degenerate primer AD)组合，以突变体基因组DNA为模板，进行多次PCR反应，特异性引物的Tm值一般在57-62℃间，而AD引物的Tm值则在44-46℃范围，采取高温特异性扩增与低温随机扩增相间进行的方法，最后获得转座子插入侧翼区特异性扩增片段，可作为探针，筛选分离基因(图4)。
图4 TAIL-PCR特异性扩增插入位点侧翼基因组序列流程图 TAIL-PCR分离法可以降低非侧翼区特异产物的背景，同时它可以产生2个以上嵌套的目的片段，与其它方法相比TAIL-PCR方法具有简便、特异、高效、快速和灵敏等特点，已经在拟南芥和水稻中获得了成功。
4.2.3 AIMS分离法：Gierl等建立的插入突变位点扩增法(Amplification of insertion Mutagenised sites AIMS)是以PCR为基础的分离转座子标签基因的方法，用它已经成功地从玉米Mu元件标签系统中分离了Bx1基因〔12〕。
其原理如图5所示，用2种限制性内切酶消化突变植株的基因组DNA，酶切片段一侧加上接头序列，再采用一组嵌套的插入序列特异引物和一个接头序列互补的引物进行PCR反应扩增插入序列的侧翼序列，为了减少扩增产物的复杂性，在与接头互补引物3’末端加上一个碱基(A\\\/T\\\/C\\\/G)，分离的侧翼序列可作为探针筛选目的基因。
利用AIMS进行转座子插入侧翼序列的分离可以减少分析片段的复杂性，同时扩增产物可以不经任何纯化步骤，直接用作探针从cDNA文库或基因组文库中筛选目的基因。
但是AIMS也存在一些问题，如难获得500bp以上的片段，可能是由于人工的未切动的DNA片段存在或是TaqDNA聚合酶不能完全扩增，解决这一问题就需要寻找一些更合适的限制性内切酶。
5 展望 目前转座子元件是植物分子生物学操作和植物基因工程中分离克隆基因和研究基因功能最有力的工具之一，其中的一大类—反转录转座子具有分布广、异源转座高和受组织培养诱导激活等优势，因此它的发现和利用又为转座子标签的应用提供了更广阔的前景。
此外通过对现有转座元件的改造以及转座元件作为载体改造的工具，也将大大加速植物基因和功能序列的分离与研究，如利用转座子元件构建启动子捕捉载体，效率比T-DNA标签高〔11〕。
但转座子标签推广还存在一些困难，例如筛选鉴定转座元件引起的表型突变体。
目前，各种突变体筛选方法都在植物个体水平进行研究，先要得到基因型包含转座子插入突变的植株的种子，再在104～106个后代的群体中筛选突变体，工作量非常大，定向标签还要求有隐性纯合系可进行杂交。
最近开始研究利用单倍体进行细胞水平的突变体筛选，因为单倍体可直接表达隐性基因，瞿绍洪等鉴定了玉米转座因子Ac在单倍体烟草中的转座活性，这将有助于在单倍体细胞中进行转座因子研究〔15〕。
对转座子标签突变体筛选、标签基因分离等方面的改进将使这一技术更为完整，不仅为植物基因工程发展分离了更多的基因，同时可以大大促进植物基因表达机制等基础理论的研究。
