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大肠杆菌实验心得体会

时间:2013-07-22 02:43

培养大肠杆菌的工作总结及心得体会

1. 发酵罐性能测试,平行性测试,熟悉发酵罐的特征首先需要对发酵罐的整体性能进行测试,考察各个监控参数,各种测量仪器(温度等电极)的稳定性。

另外,需要对四个罐的平行性进行测试,保证今后四个罐不同的结果不受本身罐体差异的影响。

2. 重复性测试例如A罐,三个批次是否具有可重复性。

保证今后的发酵过程中的稳定性。

3. 种子优化种子优化计划采用四连罐中的某个罐作为种子罐,其它三个作为发酵罐。

主要包括种子培养基优化,接种量和接种时机优化。

其中,种子培养基最为关键,以后大规模生产时,摇瓶各个阶段都采用LB培养基,发酵罐前一个为种子罐,其培养基的确定可能需要根据最终发酵培养基来确定,原则是与发酵培养基大致相通,成分尽可能的简化,最少时间达到最高OD值等。

4. 发酵工艺的优化1——发酵培养基的优化首先需要验证各种文献,尽可能的拓展我们的思路,保证每一次发酵结果能得到可用的结论,最终得到几个效果较好的培养基。

其次对这些培养基进行大幅调整,快速找到影响产量的因素。

最终,对最后的培养基进行成本核算,对影响成本的培养基成分调整或者替换,降低发酵成本。

5. 发酵工艺的优化2——发酵条件的优化以诱导前后作为节点,对诱导前后的温度,pH,溶氧,残糖含量等进行优化。

6. 发酵工艺的优化3——诱导条件的优化诱导剂加入时机,诱导剂的含量,诱导剂加入方式(主要考虑是否需要采用流加),诱导剂的替换(IPTG价格太贵,大生产并不合适,验证是否可替换成乳糖)7. 物料优化主要是考虑到物料的稳定性问题8. 发酵罐结构验证实验的目的是测试发酵罐自身结构对发酵的影响,对于可以调整的部件进行优化。

9. 通用性测试换菌种进行测试,看此套培养基和发酵工艺是否对别的菌种适用。

一旦结果不理想,接下来要做的工作是对上述方案进行逐项的验证,看哪些是通用,哪些是对菌种有特异性的要求。

10. 其它优化Amp的保质期验证; Amp是否会分解,是否需要流加;IPTG的保质期验证;微量元素混合液的保质期验证,保存方式的验证;放大的优化;各种发酵成分是否有必要分开灭菌。

等等。

这部分验证没有在下面详述,在后期的优化中可能会穿插性的验证。

平板划线法的步骤

1、不同地方述,所的培养基可能有差异,但MPN法的原相通的。

和三倍的差别仅仅是后者的浓度是前者的三倍。

而总大肠菌群所使用的平板多用伊红美蓝平板。

2、一般只处理变黄并且有气泡的,但是如果有怀疑,也可以继续往下做。

直接涂片,革兰氏染色,应取革兰氏阴性杆菌。

3、复发酵为阳性那么已经可以证实该管为阳性,不需要再次镜检了。

建议你参看国家标准GB\\\/T5750.12

配制牛肉膏蛋白胨培养基有哪些操作步骤

不,直接镜检计数,计数的是直接看到的,无论死活都会被记录上。

相比之下平板计数法只能计的且只能在所使用的琼脂平能生长的细菌。

此外平板计数法计数的细菌咯而不是细菌的个数,假设两同的细菌相距很近,那么只成一个菌落。

厌氧菌的治疗方法

以上三楼说的都很精彩啊。

不敢说有本本主义哟。

笔者行医多年,谈谈自己的经验和心得吧。

不说理论只讲经验。

腹腔厌氧菌多为革兰氏阴性杆菌,条件致病菌。

免疫力低下了,发作致病。

如本次发作,感冒后或者使用激素后(退烧过程中使用激素了

)。

  一农村患者经常反复感染,与你说的症状相类似,使用甲硝唑及三代头孢,无效后。

口服罗红霉素,效果显著,三年来病情稳定。

  一坏死性急性胰腺炎患者,严重感染,拒绝手术,在使用诸多抗生素如四代头孢马斯平,替硝唑、泰能等无明显效果后,使用阿米卡星注射液后取得良效。

  一严重腹腔感染病人,生命垂危。

使用多种抗生素无效后,使用静脉人血免疫球蛋白(临床称静丙)后,取得明显效果,直到出院。

  以上情况说明,现在厌氧菌耐药性已比较强。

长期反复使用常规药物甲硝唑、三代头孢后,耐药显著。

向罗红霉素、阿米卡星等价格便宜,在腹腔感染中使用率较低,往往能取得良效。

阿米卡星应用剂量必须足量,短期应用,副作用并不是特别明显。

免疫疗法,是常规感染的万人敌,但来源于人血,价格昂贵有诸多的不安全因素。

非必要情况不用。

  你母亲的情况,建议一、去医院彻底检查腹腔感染的原因。

二、尽量避免导致免疫力下降的因素,避免受凉感冒、如避免使用激素。

适当的改善生活,提高免疫力。

三、如果重了可以适用红霉素类抗生素及其换代产品(如罗红霉素),避免使用广谱抗生素,如三、四代头孢,各种沙星抗生素。

四、彻底治愈不容易,提高免疫力是关键。

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