鸡胚孵化和鸡胚病毒接种有哪些关键因素和步骤
[实验材料] 白壳鸡胚、孵化箱、1mL注射器、蛋架、新城疫工系和Ⅱ系弱毒苗等。
[实验准备] 1．鸡胚的选择和孵化应选健康无病鸡群或SPF鸡群的新鲜受精蛋。
为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。
用孵卵箱孵化，要特别注意温度、湿度和翻蛋。
孵化条件一般选择相对湿度为60％，最低温度36℃，一般37．5℃。
每日翻蛋最少3次，开始可以将鸡胚横放，在接种前2d立放，大头向上，注意鸡胚位置，如胚胎偏在一边易死亡。
孵化3～4d，可用照蛋器在暗室观察。
鸡胚发育正常时，可见清晰的血管及活的鸡胚，血管及其主要分枝均明显，呈鲜红色，鸡胚可以活动。
未受精和死胚胚体固定在一端不动，看不到血管或血管消散，应剔除。
鸡胚的日龄根据接种途径和接种材料而定，卵黄囊接种，用6～8日龄的鸡胚；绒毛尿囊腔接种，用9～10日龄鸡胚；绒毛尿囊膜接种，用9～13日龄的鸡胚；血管注射，用12～13日龄鸡胚；羊膜腔和脑内注射，用10日龄鸡胚。
2．接种前的准备 病毒接种材料的处理怀疑污染细菌的液体材料，加抗生素(antibiotic)(青霉素100～500IU和链霉素100～500μg)置室温中1h或冰箱12～24h高速离心取上清液，或经滤器滤过除菌。
如为患病动物组织，应剪碎、研磨、离心取上清液，必要时加抗生素(antibiotic)处理或滤过。
照蛋以铅笔划出气室、胚胎的位置(图12—1)，若要作卵黄囊接种或血管注射，还要划出相应的部位。
打孔用碘酊在接种处的蛋壳上消毒，并在该处打孔。
[鸡胚的接种] 鸡胚接种一般用结核菌素注射器注射，注射完后均应用熔化的石蜡将接种孔封闭。
1．绒毛尿囊腔内注射取9～10日龄鸡胚，用锥子在酒精灯火焰烧灼消毒后，在气室顶端和气室下沿无血管处各钻一小孔，针头从气室下沿小孔处插入，深1．5cm，即已穿过了外壳膜且距胚胎有半指距离(图12—2)，注射量约O．1～O．2mL。
注射后以石蜡封闭小孔，置孵育箱中直立孵育。
2．卵黄囊内注射取6～8日龄鸡胚，可从气室顶侧接种(针头插入3～3．5cm)，因胚胎及卵黄囊位置已定，也可从侧面钻孔，将针头插入卵黄囊接种。
侧面接种不易伤及鸡胚，但针头拔出后部分接种液有时会外溢，需用酒精棉球擦去。
其余同尿囊腔内注射(图12—3)。
3．绒毛尿囊膜接种 人工气室法(图12—4)取10～11日龄鸡胚，先在照蛋灯下检查鸡胚发育状况，划出气室位置，并选择绒尿膜发育区作一“记号”。
将胚蛋横卧于蛋座上，绒尿膜发育区“记号”朝上。
用碘酒消毒记号处及气室中心部，在气室中心部锥小孔。
然后用锥子轻锥记号处蛋壳，约0.5mm深，使其卵壳穿孔而壳膜不破。
用洗耳球吸去气室部空气的同时，随即因上面小孔进入空气而绒尿膜陷下形成一个人工气室，天然气室消失(如图12—4)。
接种时针头与卵壳成直角。
自上面小孔直刺破卵膜进入人工气室约3～5mm，注入0．1～0．2mL病料，正好在绒尿膜上。
接种完毕用熔化石蜡封闭两孔，人工气室向上，横卧于孵化箱中，逐日观察。
直接接种法将鸡胚直立于蛋座上，气室向上，气室区中央消毒打孔，用针头刺破壳膜，接种时针头先刺人卵壳约0．5cm，将病料滴在气室内的壳膜上(0．1～O．2mL)，再继续刺入约1．0～1．5cm(图12—5)，拔出针头使病料液即慢慢渗透到气室下面的绒尿膜上，然后用石蜡封孔，放人孵化箱培养。
本方法的原理为：壳膜脆，刺破后不能再闭合，而绒尿膜有弹性，当针头拔出后被刺破的小孔立即又闭 4．羊膜腔内接种所用鸡胚为10日龄，有两种方法。
开窗法从气室处去蛋壳开窗，从窗口用小镊子剥开蛋膜，一手用平头镊子夹住羊膜腔并向上提，另一手注射0．05～0．1mL病料液人腔内，然后封闭人工窗，使蛋直立孵化，此法可靠，但胚胎易受伤而死，而且易污染。
盲刺法将鸡胚放在灯光向上照射的蛋座上，将蛋转动使胚胎面向术者。
在气室顶部到边缘的一半处打一孔，用40mm长的针头垂直插入，约深30ram以上。
如已刺入羊膜腔，能使针头拨动胚即可注入病料液0．1～0．2mL，如针头左右移动时胚胎随着移动，则针头已刺人胚胎，这时应将针头稍稍提起后再注射(图12—6)。
拔出针头后石蜡封闭小孔。
置孵化箱中培养。
[接种后检查] 接种后24h内死亡的鸡胚，系由于接种时鸡胚受损或其他原因而死亡，应该弃去，24h后，每天照蛋2次，如发现鸡胚死亡立即放入冰箱，于一定时间内不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死。
死亡的鸡胚置冰箱中1～2h即可取出收取材料并检查鸡胚病变。
实验一 鸡胚接种
实验一鸡胚接种一、实验目的了解鸡胚接种的优缺点。
掌握鸡胚接种病毒操作方法。
鸡胚用于病毒培养的优缺点（一）优点1、组织分化程度低2、可选择不同的日龄和接种途径3、病毒易于增殖4、感染病毒的组织和液体中含大量病毒5、容易采集和处理6、来源充足7、设备和操作简便易行（二）缺点1、胚内可能污染细菌和病毒沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊髓炎病毒2、母源抗体3、许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针二、鸡胚的结构与功能1、卵壳2、壳膜上有细孔，进行气体交换使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。
3、气室呼吸和调节压力4、绒毛尿囊膜起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。
5、尿囊腔胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13天后，尿囊液开始变得混浊。
6、羊膜与羊膜腔其中盛有羊水，胎体浸泡于其中7、卵黄在胚胎发育早期供给鸡胚营养。
8、卵白在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
接种途径1、绒毛尿囊膜接种2、尿囊腔接种3、卵黄囊接种4、静脉接种蓝舌病毒5、羊膜腔接种正粘病毒和副粘病毒6、脑内接种狂犬病毒7、眼球接种三、实验材料1、鸡胚9-11日龄2、病毒新城疫病毒3、照蛋灯4、打孔器5、石蜡6、注射器7、蛋座8、酒精棉球、碘酊棉球四、鸡胚接种方法实验前准备
名词解释 常用鸡胚接种方法有哪些
照蛋定位完毕后，即可开始接种。
先用碘酊将接种位点和气室消毒，再用70%酒精脱碘，然后根据需要用三棱针或20号针头在蛋壳上打孔。
尿囊腔接种：最常用的接种方法，鸡新城疫、减蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用这种方法。
蛋壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎一侧近气室处所画位点打一小孔，用带5～7号针头的注射器插入孔内约1. 5cm，接种接种材料0. 1～0.2mL。
进针时针头与蛋壳应保持30℃角，不应垂直进针，注射完毕，立即用溶化的热石蜡将注射口和气室上小孔密封，然后放回37℃孵化箱孵化72～120h。
绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒和马立克氏病毒等的分离培养。
将卵壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎侧靠近气室处避开大血管用电烙铁或钢锯条将蛋壳打开1个4mm见方的小口，用刀尖小心撬开蛋壳，不能损伤卵壳膜，形成卵窗。
用针尖轻轻挑破卵窗中心的卵壳膜，但不能损伤卵壳膜下的绒毛尿囊膜。
在针尖挑破处滴1滴灭菌生理盐水或甘油，然后用吸头在气室小孔上吸气，使胚内造成负压，这时卵窗处绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见生理盐水或甘油迅速渗入。
用注射器滴加2～3滴接种物于卵窗的绒毛尿囊膜上，以透明胶纸封住卵窗。
气室小孔用石腊密封，接种后的鸡胚平放在孵化箱中，卵窗向上，不要转运。
卵黄囊接种：适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣原体及立克次氏体的分离、培养。
接种方法：气室端蛋壳消毒后，在气室中央打一小孔，用7号针头注射器垂直刺入约3cm，注射接种物约0.1～0.2mL。
石蜡封口，继续在37℃孵化，每天翻蛋2次。
病毒接种鸡胚步骤
流感病毒鸡胚接种材料：9-11龄鸡胚、孵蛋箱、照蛋器、开卵钻、石蜡、注射器、碘酒、70%酒精、镊子、二级生物安全柜等。
方法：1照蛋：⑴避开鸡胚及主动脉，找寻两血管间隙划线（最佳点）⑵划线在血管之间⑶标记蛋时不要太靠近气室处，因后面去壳时可能敲掉，导致标记不见2开孔：⑴开孔前先用75%酒精擦一下，由下而上或由上至下一遍即可，不可反复擦⑵开孔勿太大（太大不易封住，且易染菌）3注射：⑴针头45度斜插入孔中，至针头尾部到达蛋壳⑵注射后不要用力过大，抽出时不要过快⑶一针插入鸡胚，不要在里面搅拌注：⑴握病毒管时不要握底部，易使病毒失活，融化时最好冰上融化，或流水冲洗⑵吸取液体时先混匀尿囊腔接种：照检后画出气室边界和胎位，在胚胎面与气室交界处边缘约1mm处并避开血管做一标记，此即为注射点。
在点及周围用75%酒精消毒，并用钻蛋机钻开一个约2mm长小口，勿损伤壳膜。
用注射器注入流感病毒0.1-0.2ml，然后用石蜡溶化封口，置33-35度孵箱培养。
每日照检鸡胚一次，于接种后24h内死亡者为非特异性死亡应弃去。
甲型流感一般培养44-48h收获，而乙型流感病毒培养72h后进行收获。
如病毒用冷冻干燥标本进行传代，无论甲型还是乙型均培养72h后才进行收获收获前鸡胚须置4度冰箱6h或过夜，但不能置时间过长，过长会引起散黄。
如急于收获亦可置-20度冰箱1h左右，但不能过长，过长会引起鸡胚结冰，再融化时卵黄膜就破碎，卵黄就流出。
预冷的目的是：将鸡胚冻死使血液凝固
病毒的鸡胚接种
病毒的鸡胚接种 教学目标使学生掌握病毒的鸡胚接种方法和收获方法。
材料准备1.器材温箱、照蛋器、蛋架、超净工作台、1mL注射器、20～27号针头、镊子、酒精灯、灭菌吸管、灭菌滴管、灭菌青霉素瓶、铅笔、透明胶纸等。
2.种毒新城疫病毒悬液。
3.受精卵健康鸡群的受精卵，无母源抗体，产后10d之内5d最佳。
4.其他石蜡，质量分数为2.5%的碘酊及质量分数为75%的酒精棉球。
方法步骤 （一）鸡卵的保存、孵育及检卵1.保存孵育前，保存在4.5～20℃的室温内，以10℃左右最佳，最多不能超过10d。
2.孵育先将温箱调节温度为37.3～37.8℃，湿度45%～60%。
将鸡卵孵入后，每日翻卵2～3次。
3.检卵孵后第4~6d，用照蛋器检查发育情况，检出未受精及死亡鸡胚。
鸡胚的生长情况分为以下几类：（1）未受精4~6d后仅见模糊的卵黄黑影，无鸡胚迹象。
（2）生活鸡胚4~6d后可见到清晰的血管小团，内有鸡胚暗影，较大的鸡胚可见胚动。
（3）濒死或死亡鸡胚鸡胚活动呆滞或不能主动运动，血管昏暗或断折沉落。
（4）作标记将待接种的鸡胚取出，在照蛋器上照视，划出气室范围，并在鸡胚黑影，或绒毛尿囊膜发育中心等处，按接种途径要求标出记号。
（二）各种途径的鸡胚接种方法1.尿囊腔接种 （1）接种方法孵育9～11日龄的鸡胚（实图6-20），经照视后，划出气室及胚胎位置，标明胚龄及日期，气室朝上立于卵架上。
在气室中心或远离胚胎侧气室边缘先后用碘酊棉球及酒精棉球消毒。
以钢锥在气室的中央或
鸡胚成纤维细胞如何培养我最近在培养鸡胚成纤维细胞
您好，这样是监控鸡胚的生长情况，了解情况后就可以采取措施，免得造成损害
